5年（2021-2025）高考1年模拟生物真题分类汇编专题09 生物技术与工程（原卷版）（黑吉辽蒙专用）

这是一份5年（2021-2025）高考1年模拟生物真题分类汇编专题09 生物技术与工程（原卷版）（黑吉辽蒙专用），共18页。

考点01发酵工程
1.（2024·黑吉辽）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（ ）
A. 在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B. 将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C. 将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D. 判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
2.（2023·辽宁）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m³）。下列叙述错误的是（ ）
A. 采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理
B. 细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置
C. 同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值
D. 稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高
3.（2022·辽宁）为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（ ）
A. 航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物
B. 细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀
C. 在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品
D. 采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征
4.（2022·辽宁） β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述正确的是（ ）
A. 所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌
B. 通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌
C. 还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力
D. 该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发
5（2025·黑吉辽蒙）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（ ）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
6.（2021·辽宁）利用菠萝蜜制作果醋的大致流程为：先在灭菌的果肉匀浆中接种酵母菌，发酵6天后，再接入活化的醋酸杆菌，发酵5天。下列有关叙述错误的是（ ）
A．乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
B．酵母菌和醋酸杆菌均以有丝分裂的方式进行增殖
C．酵母菌和醋酸杆菌发酵过程中控制通气的情况不同
D．接入醋酸杆菌后，应适当升高发酵温度
考点02 细胞工程和胚胎工程
1.（2024·黑吉辽）从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是（ ）
A. 传代培养时，培养皿需密封防止污染
B. 选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C. 直接用离心法收集细胞进行传代培养
D. 细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
2.（2023·辽宁）大量悬浮培养产流感病毒的单克隆细胞，可用于流感疫苗的生产。下列叙述错误的是（ ）
A. 悬浮培养单克隆细胞可有效避免接触抑制
B. 用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清
C. 当病毒达到一定数量时会影响细胞的增殖
D. 培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量
3.（2022·辽宁）蓝莓细胞富含花青素等多酚类化合物。在蓝莓组织培养过程中，外植体切口处细胞被破坏，多酚类化合物被氧化成褐色醌类化合物，这一过程称为褐变。褐变会引起细胞生长停滞甚至死亡，导致蓝莓组织培养失败。下列叙述错误的是（ ）
A. 花青素通常存在于蓝莓细胞的液泡中
B. 适当增加培养物转移至新鲜培养基的频率以减少褐变
C. 在培养基中添加合适的抗氧化剂以减少褐变
D. 宜选用蓝莓成熟叶片为材料制备外植体
4.（2022·辽宁）某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。
Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制备，流程如图1
（1）构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是___________。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体___________（填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”）。
（2）质粒在包装细胞内组装出由___________组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。
Ⅱ．N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2
（3）用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用___________酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体的___________中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。
（4）用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行___________培养。用___________技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集___________，提取单克隆抗体。
（5）利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成___________，实现特异性治疗。
5．（2025·黑吉辽蒙）利用植物组织培养技术获得红豆杉试管苗，有助于解决紫杉醇药源短缺问题。下列叙述正确的是（ ）
A．细胞分裂素和生长素的比例会影响愈伤组织的形成
B．培养基先分装到锥形瓶，封口后用干热灭菌法灭菌
C．芽原基细胞由于基因选择性表达，不能用作外植体
D．紫杉醇不能通过细胞产物的工厂化生产来获取，植物组织培养优势明显
6．（2025·黑吉辽蒙）研究显示，约70%的小鼠体细胞核移植胚胎未能成功发育至囊胚期，且仅有约2%的胚胎移植到代孕母鼠后可正常发育。下列叙述错误的是（ ）
A．体细胞核进入去核的MⅡ期卵母细胞形成重构胚
B．移植前胚胎发育率低，可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态
C．胚胎移植到代孕母鼠后成活率低，可能是早期胚胎未能及时从滋养层内孵化
D．为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植
7.（2021·辽宁）下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是（ ）
A．后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定
B．过程①需要提供95%空气和5%CO2的混合气体
C．过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理
D．过程③将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植
8.（2025·黑吉辽蒙）下图是制备抗白细胞介素-6（IL-6）单克隆抗体的示意图。下列叙述错误的是（ ）
A．步骤①给小鼠注射IL-6后，应从脾中分离筛选T淋巴细胞
B．步骤②在脾组织中加入胃蛋白酶，制成单细胞悬液
C．步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性
D．步骤④经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞
考点03 基因工程
1.（2024·黑吉辽）关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（ ）
A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小
B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置
C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快
D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来
2.（2024·黑吉辽）将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（辅助T-DNA转移）和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行如下操作。回答下列问题。
注：F1-F3，R1-R3表示引物；T-DNA-LB表示左边界；T-DNA-RB表示右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。
（1）从苏云金杆菌提取DNA时，需加入蛋白酶，其作用是______。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精，其目的是______。
（2）本操作中获取目的基因的方法是______和______。
（3）穿梭质粒中p35s为启动子，其作用是______，驱动目的基因转录；插入两个p35s启动子，其目的可能是______。
（4）根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用______基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。
（5）为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是______和______。
（6）本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是______。
A. 通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞
B. 将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达
C. 将1-1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列
D. 用1-1362合成基因序列和1363-1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白
3.（2023·辽宁）CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受体。为实时监控CD163蛋白的表达和转运过程，将红色荧光蛋白RFP基因与CD163基因拼接在一起（如下图），使其表达成一条多肽。该拼接过程的关键步骤是除去（ ）
A. CD163基因中编码起始密码子的序列
B. CD163基因中编码终止密码子的序列
C. RFP基因中编码起始密码子的序列
D. RFP基因中编码终止密码子的序列
4.（2023·辽宁）天然β淀粉酶大多耐热性差，不利于工业化应用。我国学者借助PCR改造β-淀粉酶基因，并将改造的基因与pLN23质粒重组后导入大肠杆菌，最终获得耐高温的β-淀粉酶。回答下列问题：
（1）上述过程属于_____工程。
（2）PCR中使用的聚合酶属于_____（填写编号）。
①以DNA为模板的RNA聚合酶 ②以RNA为模板的RNA聚合酶
③以DNA为模板的DNA聚合酶 ④以RNA为模板的DNA聚合酶
（3）某天然β-淀粉酶由484个氨基酸构成，研究发现，将该酶第476位天冬氨酸替换为天冬酰胺，耐热性明显提升。在图1所示的β-淀粉酶基因改造方案中，含已替换碱基的引物是_____（填写编号）。
（4）为了使上述改造后的基因能在大肠杆菌中高效表达，由图2所示的pLN23质粒构建得到基因表达载体。除图示信息外，基因表达载体中还应该有目的基因（即改造后的基因）和_____。
（5）目的基因（不含EcRI酶切位点）全长为1．5kb，将其插入BamH I位点。用EcR I酶切来自于不同大肠杆菌菌落的质粒DNA，经琼脂糖凝胶电泳确定DNA片段长度，这一操作的目的是_____。正确连接的基因表达载体被EcR Ⅰ酶切后长度为_____kb。
（6）采用PCR还能在分子水平上确定目的基因是否转录，根据中心法则，可通过_____反应获得PCR的模板。
5.（2022·辽宁）抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制
B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分
C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制
D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市
6.（2025·黑吉辽蒙）香树脂醇具有抗炎等功效，从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N，可高效生产香树脂醇。回答下列问题。
(1)可从 中查询基因N的编码序列，设计特定引物。如图1所示，a链为转录模板链，为保证基因N与质粒pYL正确连接，需在引物1和引物2的5'端分别引入 和 限制酶识别序列。PCR扩增基因N，特异性酶切后，利用 连接DNA片段，构建重组质粒，大小约9.5kb（kb为千碱基对），假设构建重组质粒前后，质粒pYL对应部分大小基本不变。
(2)进一步筛选构建的质粒，以1-4号菌株中提取的质粒为模板，使用引物1和引物2进行PCR扩增，电泳PCR产物，结果如图2。在第5组的PCR反应中，使用无菌水代替实验组的模板DNA，目的是检验PCR反应中是否有 的污染。初步判断实验组 （从“1~4”中选填）的质粒中成功插入了基因N，理由是 。
(3)为提高香树脂醇合酶催化效率，将编码第240位脯氨酸或第243位苯丙氨酸的碱基序列替换为编码丙氨酸的碱基序列，丙氨酸的密码子有GCA等。a是诱变第240位脯氨酸编码序列的引物（GCA为诱变序列），b、c、d其中一条是诱变第243位苯丙氨酸的引物，其配对模板与a的配对模板相同。据此分析，丙氨酸的密码子除GCA外，还有 。
a：5'-…GCA/CCC/GAG/TTC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC…-3'
b：5'-…GAA/CTG/TGG/GAC/ACC/CTG/AAC/TAC/TTC/TCT/GAG…-3'
c：5'-…GCC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC/CCC/TAC/CAC…-3'
d：5'-…GAT/AAT/AAG/ATC/CGA/GAG/AAG/GCC/ATG/CGA/AAG…-3'
(4)进一步检测转基因酵母菌发酵得到的 含量并进行比较，可以选出最优的香树脂醇合酶基因的改造方案。
7．（2021·辽宁）PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），大小为0．9kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：
(1)为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经 过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入 和 两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用 （填“E．cliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
相关限制酶的识别序列及切割位点
注：箭头表示切割位点
(3)转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞，使其处于 的生理状态，以提高转化效率。
(4)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电分离，结果如图2， 号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0．2kb的DNA分子条带未出现在图中
(5)将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期（示意图见图3）不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的 （填“G1”或“S”或“G2/M”）期。
一、单选题
1．（2025·辽宁·模拟预测）防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列相关说法正确的是（ ）
A．只有在固体培养基表面才能生长出微生物菌落
B．固体培养基在高压蒸汽灭菌后应迅速倒平板，以防止凝固
C．为了涂布均匀，涂布时可转动培养皿，涂布后立刻将培养皿倒置，放入培养箱中培养
D．耐高温和需要保持干燥的物品，可以采用干热灭菌法，如玻璃器皿
2．（2025·辽宁沈阳·三模）现代生物技术流程中，“筛选”至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．以尿素为唯一碳源的培养基可用于筛选土壤中的尿素分解菌
B．利用选择培养基可以筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
C．筛选透明带厚的原肠胚进行移植有利于胚胎的保护和孵化
D．利用滋养层细胞进行性别筛选有助于构建乳腺生物反应器
3．（2025·辽宁·三模）为提高作物产量，种植业往往使用大量的氮肥，既增加了生产成本，又易造成环境污染。固氮菌能固定氮气，为植物生长提供充足的氮元素，常见的固氮菌有根瘤菌和圆褐固氮菌等。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。以下叙述正确的是（ ）
A．根瘤菌与豆科植物共生后才能固氮，其合成固氮酶所需的核糖体和氨基酸均来源于植物细胞
B．圆褐固氮菌能在不加氮源的培养基中生长，说明圆褐固氮菌为自养型生物
C．将土壤悬液用无菌水梯度稀释后涂布到含青霉素的选择培养基上，以抑制其他微生物的生长
D．若④统计的菌落数分别是132、136、128，则每克土壤中含有的固氮菌为1.32×107个
4．（2025·辽宁·模拟预测）下列关于微生物的选择培养和计数方法的叙述，正确的是（ ）
A．用营养齐全的培养基在80℃下培养栖热菌不属于选择培养
B．不含氮源或碳源的培养基不能用于微生物的培养
C．从加入抗生素、无氧环境下的培养基中筛选出的不一定是厌氧真菌
D．含菌溶液的稀释倍数并不会影响活菌计数法计数结果的准确度
5．（2025·辽宁·模拟预测）浆水是某省非常独特的发酵食品，明代医学家李时珍在其《本草纲目》中也有专门记述，“浆水能调中益气，宣和强力，止咳消食，利小便”。科研 工作者从浆水中分离得到了厌氧益生菌发酵黏液乳杆菌GR-3，并有望将其用于疾病治疗。下列关于利用发酵工程生产发酵黏液乳杆菌GR-3的叙述，正确的是（ ）
A．优良的发酵黏液乳杆菌GR-3可从自然界筛选，也可通过基因工程育种改良性状
B．发酵工程中，可先通气再进行密闭，以提高发酵黏液乳杆菌GR-3的菌体数量
C．若要获得发酵黏液乳杆菌GR-3的单细胞蛋白，需将细胞进行去壁、破碎等操作
D．发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节，培养基的配方不会影响发酵产物的产量
6．（2025·辽宁·模拟预测）酸笋是竹笋通过微生物发酵工艺制作而成的传统食品，具有独特的酸味和香气。下图为利用乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等微生物发酵制作酸笋的工艺流程图，有关叙述合理的是（ ）
A．杀青、漂烫步骤是通过高温灭菌避免杂菌污染
B．酸笋的酸味以乳酸菌产生乳酸为主，接种菌种后需立即通入氧气
C．醋酸菌能将酵母菌产生的乙醇氧化为醋酸，进一步丰富酸笋的酸味层次
D．发酵过程中要随时检测培养液中微生物数量，可以采用平板划线法和稀释涂布平板法
7．（2025高三下·黑龙江模拟）配制伊红-亚甲蓝琼脂培养基可用于鉴定大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽。下图为检测大肠杆菌对某种抗生素的敏感性进行的实验，图示培养两天后所见结果(①②③为加有不同浓度抗生素的圆纸片)。下列相关叙述正确的是
A．接种用的方法是平板划线法
B．实验表明不同种的大肠杆菌对同一种抗生素敏感性不同
C．①②③周围透明圈的大小差异可能与培养基的氮源不同有关
D．浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照
8．（2025·辽宁·二模）玉米赤霉烯酮（ZEN）是一种由镰刀菌属真菌产生的真菌毒素，研究人员从连作玉米田的土壤样品中分离出了可高效降解ZEN的细菌菌株，实验流程如图。下列叙述错误的是（ ）
A．步骤②③④中所用的培养基均为以ZEN为唯一碳源的选择培养基
B．实验过程中，需要将培养皿、培养瓶和培养基进行干热灭菌
C．步骤③中培养基上长出的菌落数量可能约等于涂布到平板上的活菌数量
D．可衡量b瓶中菌株的ZEN降解能力
9．（2025·辽宁鞍山·三模）紫花苜蓿是一种豆科牧草，富含植物蛋白，家畜采食后会鼓胀；百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白结合，不引起家畜采食后鼓胀。科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料，培育出抗肥胖鼓胀病的苜蓿新品种，研究主要流程如图（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R—6G可阻止线粒体的呼吸作用，二者有效抑制不同植物细胞正常代谢的临界浓度不同）。下列叙述错误的是（ ）
A．过程③表示再分化过程，诱导出芽和诱导生根不需要更换培养基
B．①过程实现了原生质体融合，其中只有异源融合体才能存活和具有再生能力
C．图中植物体细胞杂交技术实现了远缘杂交育种
D．图中再生植株培育的生物学原理主要是细胞膜的流动性及植物细胞的全能性
10．（2025·辽宁·三模）甲植物细胞的核基因具有耐盐碱效应，乙植物细胞的质基因具有高产效应。某研究小组用甲、乙两种植物（均为二倍体）进行体细胞杂交相关研究，最终获得了高产、耐盐碱的杂种植株丙，其基本操作流程如图。为获得目的植株，下列相关操作正确的是（ ）
A．对外植体消毒时，使用体积分数为95%的酒精比70%的酒精消毒效果更好
B．过程A可用纤维素酶和果胶酶处理，需在低渗溶液中进行，以防止过度失水而死亡
C．过程C中需用PEG来诱导原生质体再生出新的细胞壁
D．杂种细胞经植物组织培养形成可育二倍体，还需在个体水平做鉴定才能筛选出高产、耐盐碱的杂种植株丙
11．（2025·辽宁·二模）抗原表位指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，是抗原与T细胞或B细胞表面的抗原识别受体及抗体特异性结合的最小结构单位。下图为单克隆抗体的制备过程，下列叙述错误的是（ ）
A．可用PEG或灭活的病毒诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合
B．经选择培养基筛选所得的杂交瘤细胞能够产生的抗体共3种
C．克隆化培养和抗体检测后的每个杂交瘤细胞只能产生1种抗体
D．由图可知，利用一种抗原经杂交瘤技术可以获得多种单克隆抗体
12．（2025·辽宁·二模）与常规栽培技术相比，利用植物细胞培养进行药用次生代谢产物的生产具有显著的优越性，根据不同的需求可以采用不同的技术流程（如下图）。下列相关叙述错误的是（ ）
A．培养体系1、2、3中的细胞基因型不完全相同
B．上图的过程与植物组织培养都需要更换培养基
C．将目标产物合成途径中的关键酶基因导入悬浮细胞，可用花粉管通道法
D．愈伤组织没有叶绿体，是异养型细胞，因此需在培养基中加入有机碳源
13．（2025·辽宁·模拟预测）聚合酶链式反应（PCR）是一种用于扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。以下图DNA为模板，扩增n次后（n≥1），与已知序列两条链等长的子代DNA分子数为（ ）
A．2n+1－n－2B．2n－2n
C．2n－2D．2n－n－1
二、多选题
14．（2025·辽宁营口·三模）发根农杆菌内含有Ri质粒，经过转化可以使植物产生大量毛状根，由毛状根再生的植株往往表现出叶皱、节间短、顶端优势弱等特征。下列是利用发根农杆菌转化青蒿外植体的基本流程。下列相关说法正确的是（ ）
A．Ri质粒上可能存在使植物生成毛状根的基因
B．步骤③加入抗生素的目的是杀死发根农杆菌
C．青蒿组织培养的脱分化和再分化过程中不需要光照处理
D．步骤④加入的生长素和细胞分裂素用量的比值应该小于1
15．（2025·辽宁·三模）2018年《细胞》期刊报道，中国科学家率先成功应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，成功培育了体细胞克隆猴——“中中”和“华华”，流程如下，下列叙述错误的是（ ）
A．体外培养猴甲的体细胞时，需提供5%CO2的主要目的是促进细胞进行呼吸作用
B．采集到的卵母细胞培养到MⅡ期再通过显微操作去除其核膜包被的细胞核
C．表达的Kdm4d使重构胚中染色质组蛋白的甲基化程度降低以促进相关基因的表达，同时还常用乙醇、Ca2+载体等方法激活重构胚，使其完成分裂和发育的进程
D．在胚胎移植后，还需对代孕母猴注射免疫抑制剂，防止免疫排斥的发生
16．（2025高三下·黑龙江）下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，有关叙述正确的是（ ）
A．图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原
B．利用聚乙二醇、灭活的病毒和电融合等方法均可诱导细胞融合获得乙
C．用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长
D．丙需要进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁
三、实验题
17．（2025·辽宁沈阳·三模）大豆脂肪氧化酶（LOX）在食品加工等方面有重要作用。下图表示建立LOX基因原核表达体系生产LOX的过程。其中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，T7启动子可被IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）激活。回答下列问题。
(1)①RT-PCR（逆转录PCR）获得LOX基因（cDNA）的过程需要 的催化。为了便于基因表达载体的构建，引物F1和R1分别为 。
A．5′-GGTACCGTAGTGTTGGTGGGTTGG-3′
B．5′-CTCGAGAAAGCCAAACATGAAAGC-3′
C．5′-GGTACCAAAGCCAAACATGAAAGC-3′
D．5′-CTCGAGGTAGTGTTGGTGGGTTGG-3′
(2)图中代表基因工程核心步骤的是 （填序号）。③过程需用 处理大肠杆菌，以利于重组质粒的转化。仅利用含氨苄青霉素的培养基无法区分含有 的大肠杆菌，因此还需利用PCR等技术在 水平上对大肠杆菌进行检测与筛选。筛选后的大肠杆菌用于生产时，除营养物质外，培养基中还需添加 。
(3)已知天然的LOX具有使β-胡萝卜素漂白褪色的特性。简要叙述利用以上过程生产的LOX进行活性鉴定的实验设计思路： 。
18．（2025·辽宁沈阳·模拟预测）BMP15蛋白由卵母细胞分泌，在哺乳动物卵巢、卵泡的生长发育、成熟以及排卵过程中起着不可或缺的作用。科研人员克隆出新西兰白兔BMP15基因后，构建该基因的真核表达载体，并对产生的BMP15蛋白进行分析。相关实验过程如图1所示。请回答下列问题。
(1)选取幼龄健康的新西兰白兔雌兔，采集 组织的RNA，经①～③过程可获得大量的BMP15基因。①②过程中需要用到的酶分别是 。
(2)③过程中，添加的一种引物序列为5′—CGGAATTCGGATGGCCCTCTCAGCATCCT—3′，则下列序列中最有可能是另一种引物序列的是____。
A．5′-GGTGGTTGGTTGGGCTTTTCAATTCCCGCG-3′
B．5′-TCAGGACGTGTACAGCCACTCCATGGGGC-3′
C．5′-CGGGGTACCTCACCGACATGTGCAGGACT-3′
D．5′-AGGTACCTGAGGAGGGCCATCCGAATTCCG-3′
(3)图示重组载体pCMV-Myc-BMP15中，未标明的结构有 ，CMV启动子的作用是 。
(4)④步骤应将转化好的菌涂在含有 的培养基上，筛选获取菌落。若通过抗原—抗体杂交技术来检测融合Myc-tag标签的BMP15蛋白是否表达成功，一般需加入 。
(5)实验组将重组载体pCMV-Myc-BMP15转染到人胚肾细胞HEK293T内，对照组将 转染到相应受体细胞，收取细胞样品用于检测mRNA和蛋白质水平的表达效果。检测结果如图2（CON：对照组；OVE：重组质粒转染组）。
分析图示结果可知 。
(6)对不同物种BMP15基因进行核苷酸序列比较，得到下表，据表推测，兔与 的亲缘关系最近。
19．（2025·辽宁·模拟预测）基因工程中合理的利用启动子能起到调控基因表达的作用。当诱导物存在时，诱导型启动子可启动目的基因的表达。帕金森病（PD）严重威胁中老年人健康。神经节苷脂（GM1）是临床用于治疗PD的药物之一。猪脑中的GM1含量低，但合成GM1的原料GD（一种生物大分子）的含量较多，GD可在唾液酸酶的作用下生成GM1。研究人员将唾液酸酶的mRNA逆转录得到的M基因与质粒P构建成基因表达载体M—P，导入大肠杆菌中，以获得唾液酸酶高产菌株，用以满足工业化生产GM1的需求。图1为M基因两端的碱基对序列；图2为P质粒的结构示意图；图3为EcRI和BamHI两种限制酶的识别序列和酶切位点。
(1)图2质粒P的结构中，四环素抗性基因的功能是 。
(2)M基因以a链为模板链进行转录，利用PCR技术扩增M基因时，需依据图1、图3中的已知碱基序列等信息设计引物，设计的两引物碱基序列为5'- -3'（写出10个碱基）和5'- -3'（写出10个碱基）。
(3)对受体菌进行分子水平的检测，发现存在M基因；继续在培养基中加入GD，但是却检测不到M基因相应的mRNA，原因是 。为了解决上述问题，可以使用 （“基因工程育种”或“诱变育种”或“杂交育种”）技术获得新品种，从而得到唾液酸酶高产菌株。
20．（2025·辽宁·模拟预测）在冷冻胁迫中草本植物的细胞膜是首先受到伤害的部位，细胞膜的不可逆伤害是造成冻害的主要原因。SAD（硬脂酰基载体蛋白脱氢酶）基因是调控植物抗冻性的基因之一，是不饱和脂肪酸合成途径中的关键脱氢酶基因。利用脱氢酶将适量的不饱和键引入脂肪酸中，能有效降低冷冻伤害，使膜具有必要的流动性，维持生物膜的正常功能。现利用基因工程技术培育抗冻马铃薯。回答下列问题。
注：图1中A、F、B、R为引物，图2中P为启动子，T为终止子，ri为复制原点，YGFP为黄绿色荧光蛋白基因，HygBR为潮霉素抗性基因，马铃薯在自然状态下不具有潮霉素抗性。
(1)SAD基因可从已知结构和功能清晰的基因中筛选，也可从 中检索相关序列信息。为使SAD基因与载体正确连接，对SAD基因进行PCR扩增时，应选择引物 ，在其对应5’端分别添加限制酶 的识别序列。
(2)将构建成功的表达载体导入农杆菌，与马铃薯叶片共培养，利用T-DNA 的特点，可将SAD基因导入马铃薯叶片细胞。
(3)为探究转化过程中农杆菌侵染时间与转化效率之间的关系，以马铃薯栽培种（De）和野生种（Sc）1cm左右茎段作为受体材料进行了研究。在马铃薯与农杆菌共培养的培养基中添加 ，用于筛选被侵染的马铃薯茎段。将筛选出的马铃薯茎段转移至再生培养基2周后，使用365nm紫外光手电筒照射， （填“阳性”或“阴性”）转化茎段会呈现黄绿色荧光，否则茎段为红色，观察荧光，并进行记录，计算出不同侵染时间下的转化效率（荧光外植体数量/外植体总数量×100%），如图3、4。结果表明 。
(4)在一定程度上，植物的抗冻性随着细胞膜中不饱和脂肪酸含量增加 。从个体生物学水平，鉴定转SAD基因马铃薯培育是否成功的方法是 。
考点
五年考情（2021-2025）
命题趋势
考点1 发酵工程
2024·辽宁、吉林、黑龙江
2023·辽宁
2022·辽宁（2道选择）
从近五年辽宁省高考试题来看，常出现的考点是发酵工程和细胞工程、基因工程，发酵工程和细胞工程难度适中，基因工程非选择题难度较大。发酵工程和细胞工程常以选择题的形式考察、每年一道或2道、基因工程是高频考点，每年选择非选择都有考察。
考点2 细胞工程和胚胎工程
2024·辽宁、吉林、黑龙江
2023·辽宁
2022·辽宁（1道选择、1道非选择）
考点3 基因工程
2024·辽宁、吉林、黑龙江（1道选择、1道非选择）
2023·辽宁（1道选择、1道非选择）
2022·辽宁
名称
识别序列及切割位点
名称
识别序列及切割位点
HindⅢ
A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcRI
G↓AATTC
CTTAA↑G
PvitⅡ
CAG↓CTG
GTC↑GAC
PstI
CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnI
G↓GTACC
CCATG↑G
BamHI
G↓GATCC
CCTAG↑G
比较项目
同源性（%）
兔
马
猪
绵羊
鸡
变异度（%）
兔
81.2
81.9
79.9
38.3
兔
马
18.8
82.2
84.5
38
马
猪
18.1
18.1
87
38.6
猪
绵羊
19.2
16.5
13.4
39.7
绵羊
鸡
88.5
90.3
92.6
86.4
鸡
兔
马
猪
绵羊
鸡