第34讲 发酵工程-第2课时 微生物的培养技术及应用-2026年高考生物一轮复习课件（含练习、讲义及答案）

这是一份第34讲 发酵工程-第2课时 微生物的培养技术及应用-2026年高考生物一轮复习课件（含练习、讲义及答案），文件包含02-第34讲发酵工程-第2课时微生物的培养技术及应用pptx、55课时作业五十微生物的培养技术及应用正文作业手册docx、55课时作业五十微生物的培养技术及应用答案作业手册docx、02第34讲第2课时微生物的培养技术及应用正文听课手册docx、02第34讲第2课时微生物的培养技术及应用答案听课手册docx等5份课件配套教学资源，其中PPT共60页， 欢迎下载使用。
微生物的培养技术及应用
考点一 微生物的基本培养技术（识记·应用类）
考点二 微生物的选择培养和计数（识记·应用类）
（1）培养基的概念、用途和类型
①概念：人们按照微生物对__________的不同需求，配制出的供其__________的营养基质。②用途：用以________________________微生物或积累其________。
培养、分离、鉴定、保存
分离、鉴定、计数
（2）培养基的营养组成
①一般都含有____、______、______和无机盐。②还要满足微生物生长对__________________________的需求,如：
（1）目的：获得____________________。（2）关键：防止______污染。
（3）消毒与灭菌的比较
（2）酵母菌纯培养的操作步骤
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
④平板冷凝后,要将平板倒置。因为平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,平板倒置后,既可避免培养基表面的水分过快地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基。
（3）平板划线法①平板划线法的操作步骤
②平板划线时每次灼烧的目的
【考点易错】（明辨析）
（1）微生物在液体培养基中生长可形成菌落。（ ）
[解析] 菌落是分散的微生物在固体培养基上大量繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。在液体培养基中不能形成菌落。
（2）获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。（ ）
（4）牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏为碳源，蛋白胨为氮源。（ ）
[解析] 牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏和蛋白胨都能提供氮源和碳源。
（5）[2023·河北卷] 平板倒置培养为筛选乳酸菌创造无氧环境。（ ）
[解析] 平板倒置培养既可避免培养基表面的水分过分地挥发，又可防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基，不是创造无氧环境。
[解析] 煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢,灭菌能杀灭环境中一切微生物,包括孢子和芽孢。
（7）[2022·湖北卷] 为防止蛋白质变性,不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。（ ）
[解析] 一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌,以防止杂菌污染。
【长句拓展】（练思维）
1.某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，可能的原因是_____________________________________________________________________。
菌液浓度过高、划线次数过少或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌
2.平板划线时最后一次划线不能与第一次划线相连的原因是__________________________________________________________________________________________________。
最后一次划线已经将菌液稀释到较低浓度，如果与第一次划线相连，则增加了菌种数目，达不到纯化的效果
3.未接种的培养基直接培养起的作用是________________________________________________________________________________________________________________________。
做空白对照，判断培养基灭菌是否彻底，判断培养基是否被污染；若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基灭菌彻底且没有被污染
命题角度一 考查无菌技术及培养基
[解析] 苷露醇主要为该微生物提供碳源，A错误。
2.[2025·江苏镇江月考] 防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是（ ）
[解析] 对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，而不用干热灭菌法，C错误。
无菌技术的三个主要注意点①实验前应对操作空间、操作人员进行消毒，对所用器具和培养基进行灭菌。②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作。③避免已杀菌处理的材料再次被污染。
命题角度二 考查微生物的纯培养
2.微生物的选择培养——稀释涂布平板法的操作步骤
（1）系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过__________的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量______，细胞得以分散。
3.微生物的数量测定——两种计数方法的比较
细菌计数板或血细胞计数板
［提醒］血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。间接计数法常用于对活菌计数。
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）实验原理①绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。②配制以尿素为唯一氮源的选择培养基，能够生长的细菌可能是能分解尿素的细菌。
（1）稀释涂布平板法既能分离细菌，也能对细菌进行计数。（ ）
（2）筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。（ ）
（3）用显微镜对酵母菌直接计数时，只需要选择一次计数即可。（ ）
[解析] 为了减少实验误差，用显微镜对酵母菌进行直接计数时，不能选择一次计数，而是需要重复进行计数，然后取平均值。
（4）当牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显小于选择培养基上的菌落数目时，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落。（ ）
[解析] 若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显大于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基已筛选出一些菌种。
（6）稀释涂布平板法计数时,平板上的一个菌落就是一个细菌。（ ）
[解析] 当稀释度足够高时,平板上的一个单菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。
（7）[2023·江苏卷] 血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。（ ）
[解析] 血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等。
2.利用稀释涂布平板法纯化分解尿素的细菌时，经培养后发现培养基上出现多种菌落，可能的原因有_____________________________________________________。
操作过程存在杂菌污染；可能存在自生固氮菌形成的菌落
若平板中的菌落数小于30，说明稀释倍数太大，会造成误差；若平板中的菌落数大于300，则菌落的生长受到抑制，并且难以区分各个菌落，也不能准确计数，会造成误差
3.稀释涂布平板法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低的原因是________________________________________________________。
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
命题角度一 考查微生物的选择培养与计数
1.[2025·广东潮州月考] 为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员从土壤中筛选纤维素分解菌并计数，部分操作流程如图。下列叙述正确的是（ ）
①土壤取样时，应做到随机取样 ②富集培养可采用液体培养基，可充分利用其中的营养物质 ③选择培养的培养基应以纤维素为唯一碳源④进行系列梯度稀释的目的是便于涂布平板后得到单菌落 ⑤涂布平板时，将涂布器从酒精中取出后，立即放在火焰上灼烧防止污染 ⑥菌落计数时，统计的菌落数往往比实际数目少
A.①②③④B.①③④⑥C.②③④⑥D.②③④⑤
[解析] ①获取土壤中纤维素分解菌时需要选择富含纤维素的环境，如树林中堆积的落叶经长时间发酵分解形成的腐殖土，①错误；②富集培养可采用液体培养基，可充分利用其中的营养物质，②正确；③分析题意，本实验的目的是从土壤中筛选纤维素分解菌并计数，选择培养的培养基应以纤维素为唯一碳源，③正确；④进行系列梯度稀释的目的是便于涂布平板后得到单菌落，④正确；⑤将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后放在火焰上灼烧，⑤错误；⑥菌落计数时，统计的菌落数往往比实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，⑥正确。综上所述，C符合题意。
命题角度二 考查微生物培养的实践应用
[解析] 在一定的自然区域内，同种生物的所有个体是一个种群，题图所示培养基上长出的所有大肠杆菌属于一个种群，A正确；
4.[2024·山东济南一模] 某实验小组通过控制苯浓度，对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养，挑选出合适的培养条件，同时驯化培养出较好的苯降解菌，培养的实验结果如下表所示。下列有关叙述错误的是 （ ）
几种微生物的营养和能量来源
1.[2024·江苏卷] 酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（ ）
[解析] 平板划线法无须稀释，A错误；由图可知，②挑取不能在尿素为唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误；所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不
3.[2024·全国甲卷] 合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。
（1）该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是_______________________________________________________。
显微镜直接计数法统计细菌总数，菌落计数法只统计活菌数
[解析] 显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法只计数活菌，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。
（3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是______，冷却的目的是__________________。
[解析] 灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。
（4）据图可知杀菌效果最好的消毒液是___，判断依据是_________________________________________________________________________________。（答出两点即可）
相同处理时间下使用A后活细菌减少量最大；使用A达到活细菌减少量最大时所用时间最短
[解析] 由图可知，在相同时间内，A消毒液活菌减少量最多，且在较短时间内能达到较好的杀菌效果，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。
（5）鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈______________色。
[解析] 大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色或深紫色。
1. 调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物。下列叙述正确的是( )A.培养乳酸菌时应液体悬浮振荡培养以保证氧气供应B.光照条件下培养蓝细菌时只需提供水和无机盐而不需要提供有机物C.在以尿素为唯一氮源的培养基上长出菌落的微生物一定能分泌脲酶D.硝化细菌和圆褐固氮菌都可在不添加任何氮源的培养基上生长
[解析]乳酸菌为厌氧菌, 应隔绝空气培养,A错误;蓝细菌可以进行光合作用,在光照条件下能将CO2转变为有机物,因此只需提供水和无机盐,不需要提供有机物,B正确;在以尿素为唯一氮源的培养基上长出菌落的微生物也有可能是自生固氮菌,能利用空气中的氮气,不一定能分泌脲酶,C错误;硝化细菌能利用化学反应放出的能量将CO2转变为有机物,不能固氮,因此培养硝化细菌的培养基中必须有氮源,D错误。
2.某研究团队从食塑料蜡虫肠道中分离能降解聚乙烯(PE)的细菌,以解决塑料污染问题。将分离得到的两种细菌(YT1和YP1)在PE薄膜培养液中培养,培养液中细菌数量变化以及PE失重率(降解PE能力的高低)变化如图所示。下列叙述正确的是( )
A.用经湿热灭菌后的含PE、葡萄糖和无机盐等成分的液体培养基分离目的细菌B.分离得到目的细菌的纯培养可用平板划线法在酸性选择培养基上进行C.欲得到图甲曲线中的数据常用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法D.在第20天后两种细菌群体降解PE的能力差异增大,且细菌YT1强于细菌YP1
[解析]分离目的细菌要用PE为唯一碳源的固体培养基,不加葡萄糖,A错误;细菌应在酸碱度接近中性或弱碱性的环境中培养,B错误;对微生物进行计数,得到图甲曲线过程中的数据常用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法,C正确;20天后,由PE失重率变化曲线可知YP1组明显高于YT1组,即细菌YP1降解PE的能力强于细菌YT1,D错误。
3. “掌心对掌心,手心压手背,十指交叉摩,手握关节搓,拇指围轴转,指尖掌心揉,手腕别放过。”七步洗手法可以清除手部的污物和微生物,是预防传染病的有效措施之一。某生物实验小组设计了“比较洗手前后手上细菌分布情况”的探究活动:各小组成员分别将拇指在甲组培养基上轻轻按一下,然后用肥皂将该手洗干净,再将洗净后的拇指在乙组培养基上轻轻按一下。将这两组培养基放入恒温培养箱中,在适宜温度下培养24小时后,统计两组培养基中菌落数目,请回答下列问题:
(1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水,蛋白胨可以为微生物的生长提供　 　 等营养物质,为了使配制的溶液呈固体状态,还需要加入　 　。 
[解析] 该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水,蛋白胨来源于动物原料,含有糖、维生素和有机氮等营养物质,故蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质;为了使配制的溶液呈固体状态,还需要加入凝固剂,如琼脂。
(2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的　 　,该操作应该在酒精灯火焰附近进行,原因是_____________________________________。 
[解析]实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的接种;该操作应该在酒精灯火焰附近进行,这样能够保证接种处于无菌环境中,防止周围环境中的微生物污染培养基。
避免周围环境中的微生物污染培养基
(3)统计甲、乙两组培养皿中的菌落,乙组中菌落数比甲少,但实验结果也说明用肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物。为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基,洗过的手还应进行_____________________________ (答出1种即可)等处理。  
[解析]为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基,还应用酒精棉球擦拭双手、戴消毒手套等。
用酒精棉球擦拭、戴消毒手套
 (4)有同学认为乙中也有菌落产生是因为培养过程受到杂菌污染,请你在本实验的基础上设计一个简单的方案验证他的猜想是否正确,并预期结果和结论。______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 
再加一个不接种的相同培养基(空白培养基),与甲、乙在相同条件下培养,若该培养基上没有生长菌落,说明培养过程未被杂菌污染,猜想错误;若该培养基上生长菌落,说明培养过程被杂菌污染,猜想正确
[解析]若要验证乙培养基是否被污染,需要再加一个不接种的相同培养基作为对照,与甲、乙在相同条件下培养,若该培养基上没有生长菌落,说明培养过程未被杂菌污染,则猜想错误;若该培养基上生长菌落,则说明猜想正确。
4.丁草胺是一种有机除草剂,主要用于水稻田杂草的防除,具有潜在的致畸变和致突变性。而在水稻种植过程中农田有一段很长的淹水期,淹水会导致水稻田深层土壤处于缺氧状态。因此研究丁草胺厌氧降解菌对于水稻田土壤中丁草胺的降解具有重要意义。研究人员要对丁草胺厌氧降解菌进行分离、鉴定和扩大培养(如图),请回答下列问题:
(1)配制选择培养基时,研究人员先加入了K2HPO4、KH2PO4、FeSO4、MgCl2、NH4Cl、CaCl2、NaCl、微量元素复合液、维生素复合液等,他们还需要加入一定量的　 　 。对培养基灭菌通常采用___________法。灭菌结束后,应趁热将适量培养基分装于锥形瓶中,充入氮气,塞住胶塞并用铝帽固定,这样操作的目的是　 　。 
[解析] 配制培养基时除微生物生长所必需的营养物质外,还需加入一定量的丁草胺。培养基灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。灭菌后的培养基趁热充入氮气的目的是去除培养基中的氧气,创造无氧环境。
(2)步骤③中,应将平板放入厌氧罐中,置于培养箱中恒温培养,对长出的菌落进行初步鉴定。菌落特征是初步区分微生物类型的重要依据,这些特征包括　 　 (至少答出2点)等。 
菌落的形状、大小、颜色、隆起程度、边缘特征
[解析]菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度、颜色、边缘特征、光泽等。
(3)步骤④中,从第二次划线操作起,每次总是要从上一次划线的末端开始划线,其原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________________。
[解析]划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随划线次数的增加逐步减少,最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随划线次数的增加逐步减少,最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落
题组一 微生物的基本培养技术
1.[2024·湖南永州模拟] 有文章指出手机屏幕比马桶按钮单位面积上的细菌多，某研究小组通过实验观察了手机屏幕与马桶按钮单位面积内的细菌数目，实验结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A.为了防止杂菌污染，在接种前要对超净工作台进行紫外线灭菌B.本实验需要准备酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等C.图中实验员采用的接种方法为稀释涂布平板法D.本实验使用的培养基应该含有水、碳源、氮源和无机盐等
[解析] 为了防止杂菌污染，在接种前要对超净工作台进行紫外线消毒，A错误；图示平板中的菌落分布比较均匀，因而可推测图中实验员采用的接种方法为稀释涂布平板法，该方法需要准备酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等，B、C正确；本实验使用的培养基应该含有水、碳源、氮源和无机盐等，另外还需要加入琼脂，因为菌落是在固体培养基上长出来的，D正确。
2.[2024·江西宜春模拟] 亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的富硒细菌可将亚硒酸钠还原为红色单质硒，如图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程，①～⑤为相应步骤。下列相关叙述错误的是（ ）
[解析] 培养细菌时，培养基应该调至中性或弱碱性，A错误；步骤④中，如果菌落周围出现红色区域，则说明含有富硒细菌，为
了筛选出优良菌株，可比较单菌落周围红色区域的大小，从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，接种于新的培养基平板，对菌株进行进一步纯化，C正确；为检测培养基平板灭菌是否合格，可随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察是否有菌落产生，D正确。
3.[2024·山西大同模拟] 在植物的根际土壤中，存在着可将难溶性磷酸盐中的磷释放出来供植物吸收利用的微生物，被称为溶磷菌。科研人员从不同林龄望天树人工林根系土壤中筛选高效溶磷细菌，以期为望天树微生物肥料的开发与应用提供菌种资源。下列相关叙述错误的是（ ）
A.实验过程中需保持等量的指标有土壤用量、稀释倍数、接种体积B.将适宜稀释度的土壤溶液用涂布器涂布于含磷酸盐的固体培养基上C.本实验中稀释倍数较多，为区分不同培养皿需在皿盖上做好标记D.实验使用的土壤不用灭菌，但接种工具、培养设备必须严格灭菌
[解析] 实验过程中土壤用量、稀释倍数、接种体积均属于无关变量，需保持相同且适宜，A正确；使用选择培养基筛选高效溶磷细菌，用稀释涂布平板法，将适宜稀释度的土壤溶液用涂布器涂布于含磷酸盐的固体培养基上，B正确；本实验中稀释倍数较多，因为含有培养基的培养皿需要倒置，为区分不同培养皿需在皿底上做好标记，C错误；实验时要严格遵循无菌操作，实验使用的土壤不用灭菌，但接种工具、培养设备必须严格灭菌，D正确。
4.[2024·安徽合肥三模] 滥用抗生素会导致“超级细菌” （对多种抗生素有高耐药性）
A.可通过提高抗生素浓度避免超级细菌的产生B.用接种环在培养基上连续划线获得如左图所示的实验菌落C.图中含青霉素的培养基的菌落周围会出现抑菌圈D.细菌培养基在使用前、后均需经过灭菌处理
的产生。某实验小组研究细菌产生青霉素抗性与青霉素之间的关系，过程及结果如下图。下列叙述正确的是（ ）
[解析] 超级细菌的产生是基因突变的结果，抗生素起到选择作用，提
高抗生素浓度不能避免超级细菌的产生，A错误；用接种环在培养基上连续划线获得单个菌落是平板划线法，图示实验菌落（分布较均匀）不是通过平板划线法获得的，是用稀释涂布平板法获得的，B错误；图示在含有青霉素的培养基中有菌落存活，说明菌体对青霉素具有抗性，菌落周围没有抑菌圈，C错误；细菌培养基在使用前灭菌是防止杂菌污染，使用后灭菌是为了防止污染环境和感染操作人员，D正确。
5.[2024·湖北武汉模拟] 兔子的盲肠占整个消化道的一半，其中含有大量的微生物帮助兔子消化，这可能是兔子能从富含纤维素的食物中获得营养物质的关键。为了分离出兔子盲肠中分解纤维素能力最强的菌种，下列相关操作正确的是（ ）
A.为缩小选择范围可用只含纤维素粉的溶液淘汰部分菌种B.在营养物质充足的有氧环境中更有利于分离得到目标菌种C.相同条件下用无菌水模拟接种操作来判断培养基是否符合无菌要求D.在含有土豆汁的培养基中加入纤维素粉和刚果红可制备鉴别培养基
[解析] 只含纤维素粉的溶液中缺少氮源、无机盐等，无法培养、保留能分解纤维素的微生物，A错误。动物肠道中一般都是缺氧环境，所以缺氧环境应该更有利于分离得到目标菌种，B错误。要判断培养基是否符合无菌要求，需将未接种的平板置于适宜条件下培养一段时间，看是否有菌落长出，用无菌水模拟接种操作可用来判断接种过程是否符合无菌要求，C错误。刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应；当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红-纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此可以在含土豆汁的培养基中加入纤维素粉和刚果红来鉴别所培养的菌种是否能分解纤维素，D正确。
题组二 微生物的选择培养和计数
6.[2024·福建福州一模] 纤维素、半纤维素、木质素参与构成植物细胞壁。可从白蚁的肠道中分离木质素分解菌来降解利用木质素，已知木质素降解过程使苯胺蓝培养基脱色。以下说法错误的是（ ）
A.可以木质素为唯一碳源，用稀释涂布平板法分离木质素分解菌B.脱色圈直径与菌落直径比值越小，木质素分解菌分解效果越好C.在选择培养基上挑选出菌落后，可通过平板划线法进一步纯化D.除了白蚁肠道，还可从腐烂的树皮表面分离出木质素分解菌
[解析] 在筛选菌株的时候，常用到选择培养基，以木质素为唯一碳源，用稀释涂布平板法可分离木质素分解菌，A正确；木质素降解过程使苯胺蓝培养基脱色，脱色圈直径与菌落直径比值越大，说明菌落周围的木质素被分解得越多，分解效果越好，B错误；平板划线法是一种常用的微生物纯化方法，通过连续划线的方式，可以逐步稀释并分离出单个微生物，最终得到单菌落，因此在选择培养基上挑选出菌落后，可通过平板划线法进一步纯化，C正确；木质素是植物细胞壁的主要成分之一，因此在植物组织分解的过程中，木质素分解菌起着重要的作用，除了白蚁肠道这种特定的环境外，腐烂的树皮等植物残骸也是木质素分解菌的重要栖息地，所以可以从这些环境中分离出木质素分解菌，D正确。
7.[2024·广东广州模拟] 富集培养主要是指利用不同微生物生命活动特点的不同，限定环境条件，使特定种类微生物旺盛生长，使其在数量上占优势，更有利于分离出该特定微生物。如图是采用富集方法从土壤中分离能降解酚类
A.用经湿热灭菌后的含对羟基苯甲酸、葡萄糖和无机盐等成分的液体培养基多次重复培养样品之后，培养物中目标微生物的比例将大大增加B.用平板划线法分离纯化目标微生物，配制好培养基后依次进行灭菌、调节酸碱度和倒平板操作C.微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物D.⑤为选择培养基，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，统计结果一般用菌落数表示
[解析] 培养基中含有葡萄糖，不具有选择作用，因此培养物中目标微生物的比例不会大大增加，A错误；用平板划线法分离纯化目标微生物，配制好培养基后依次进行调节酸碱度、灭菌和倒平板操作，B错误；
微生物的纯培养物是指由单一个体繁殖所获得的微生物群体，而不是不含有代谢废物的微生物培养物，C错误；⑤为选择培养基，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用菌落数表示，D正确。
8.[2024·湖北武汉月考] 2024年《科学》杂志声称科学家首次发现了一种固氮真核生物“硝基体”，其内部存在“特殊氨工厂”结构，可以利用空气中的氮气。进一步研究发现“硝基体”曾经是一种固氮细菌，一亿年前开始生活在藻类内部，成为其共生体，“硝基体”中大约有一半蛋白质编码依赖宿主基因组。下列有关叙述错误的是（ ）
9.[2024·河北承德二模] 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下，下列说法正确的是（ ）
10.科研人员以杉木根际土壤为供试土壤，取摇床振荡后的土壤溶液上清液等比稀释，涂布于含有磷酸三钙的无机磷培养基上，记录各菌株的溶磷圈直径、菌落直径及二
者比值，挑取菌落通过平板划线法进行纯化，并利用摇瓶定量筛选出高效溶磷菌，结果如图（CK为对照组）。下列说法错误的是（ ）
11.[2024·江西南昌模拟] 金黄色葡萄球菌是人类化脓性细菌感染中最常见的病原体。研究发现乳酸杆菌可以抑制金黄色葡萄球菌的感染，这展示了通过微生物干预金黄色葡萄球菌感染的光明前景。某实验小组欲从酸奶中筛选对金黄色葡萄球菌有拮抗作用的乳酸杆菌菌株，请回答下列问题。
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（2）该实验中用于鉴别菌株的培养基要用固体培养基，而不能用液体培养基，其原因是___________________________________。固体培养基中一般加入______作为凝固剂。在固体培养基上培养后通过某些特征可实现菌株的初步鉴别，这些特征包括___________________________________（答出三种）。
微生物在液体培养基中不能形成菌落
菌落的形状、大小、隆起程度和颜色
[解析] 鉴别菌株时是通过观察菌落特征实现的，而菌落需要在固体培养基中呈现出来，因此在鉴别菌株时应该用固体培养基，而不能用液体培养基。制备固体培养基时常加入琼脂作为凝固剂。可通过菌落特征鉴别菌种，菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。
（3）为了检测筛选获得的乳酸杆菌对金黄色葡萄球菌的拮抗作用，该实验小组取金黄色葡萄球菌菌液稀释后均匀涂布于固体培养基上，然后将牛津杯（玻璃圆形小管）放置在平板上，
干热灭菌法
乳酸杆菌A和乳酸杆菌B都能抑制金黄色葡萄球菌生长，且乳酸杆菌B的拮抗效果优于乳酸杆菌A
[解析] 实验中使用的牛津杯是玻璃器皿，对玻璃器皿灭菌常采用干热灭菌法。对照组的牛津杯中应加入等量的无菌水。题图显示，加入乳酸杆菌A、B都能形成透明圈，且乳酸杆菌B的透
明圈更大，因此可得出的实验结论是乳酸杆菌A和乳酸杆菌B都能抑制金黄色葡萄球菌生长，且乳酸杆菌B的拮抗效果优于乳酸杆菌A。
12.[2025·江苏苏州月考] 经人工诱变后，部分细菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了营养缺陷型菌株，这在工业生产上有较广阔的应用前景。以下是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程，请回答下列问题：
（1）制备如图所示的培养基除含有细菌必需的________________________等营养物质外，还需要加入__________________。配制好的培养基常采用______________法进行灭菌。
碳源、氮源、水和无机盐
[解析] 题图所示培养基上最后都长出了菌落，说明该培养基为固体培养基，因此制备该培养基时除加入细菌必需的水、碳源、氮源、无机盐等营养物质外，还需要加入凝固剂（或琼脂）。配制好的培养基在灭菌时需要保证达到灭菌目的的同时保持培养基中的水分，适宜选用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法）。
（2）倒平板时，待平板冷凝后，需要将平板倒置，这样做的目的是______________________________________________；图中过程①采用的接种方法是________________，该方法用于微生物数量测定时，统计的菌落数往往比活菌数目____（填“ 多”或“少”）。
防止皿盖上的水珠落入培养基，防止水分过快蒸发
的菌落均匀分布。该方法用于微生物数量测定时，统计的菌落数往往比活菌数目少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（3）进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至______（填“基本”或“完全”）培养基上，原因是________________________________。
防止基本培养基中混入特定氨基酸
[解析] 进行过程②培养时，为防止特定氨基酸混入基本培养基中，应先将
丝绒布转印至基本培养基上，再转接至完全培养基上。
（4）利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取_______（填“菌落A”或“菌落B”）进行接种培养，并进一步鉴定。
[解析] 利用影印法培养可以使不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，比较基本培养基和完全培养基可知，菌落A为氨基酸缺陷型菌株，因此需要挑取菌落A进行接种培养，并进一步鉴定。
（5）科研人员用放射线处理目的菌获得两个突变株C和D，然后对突变株C和D进行实验，结果如表所示。
突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是_____________________________________。将突变株C和D混合在一起，接种于一般培养基上，都能生长的最可能的原因是__________________________________________________________________________________________。
突变株C缺乏合成营养物质甲所需要的酶
突变株D可以提供突变株C生长需要的营养物质甲，突变株C可以提供突变株D生长需要的营养物质乙
[解析] 由表格分析可知，突变株C的生长依赖营养物质甲，而突变株D的生长依赖于营养物质乙，不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株C为突变株D提供了营养物质乙，突变株D为突变株C提供了营养物质甲。
长句拓展·练思维 1.菌液浓度过高、划线次数过少或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌 2.最后一次划线已经将菌液稀释到较低浓度，如果与第一次划线相连，则增加了菌种数目，达不到纯化的效果 3.做空白对照，判断培养基灭菌是否彻底，判断培养基是否被污染；若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基灭菌彻底且没有被污染
典型例题 提能力 命题角度一 考查无菌技术及培养基 1.A 2.C 命题角度二 考查微生物的纯培养 3.D 4.B
长句拓展·练思维 1.若平板中的菌落数小于30，说明稀释倍数太大，会造成误差；若平板中的菌落数大于300，则菌落的生长受到抑制，并且难以区分各个菌落，也不能准确计数，会造成误差 2.操作过程存在杂菌污染；可能存在自生固氮菌形成的菌落 3.当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 典型例题 提能力 命题角度一 考查微生物的选择培养与计数 1.C 2.A
命题角度二 考查微生物培养的实践应用 3.D 4.D 经典真题·明考向 1.C 2.C 3.（1）显微镜直接计数法统计细菌总数，菌落计数法只统计活菌数 （2）5000 （3）灭菌 避免高温杀死细菌 （4）A 相同处理时间下使用A后活细菌减少量最大；使用A达到活细菌减少量最大时所用时间最短 （5）黑（或深紫）
题组一 微生物的基本培养技术 1.A 2.A 3.C 4.D 5.D 题组二 微生物的选择培养和计数 6.B 7.D 8.A 9.B 10.C