2025-2026学年广西壮族自治区高考生物全真模拟密押卷含解析

这是一份2025-2026学年广西壮族自治区高考生物全真模拟密押卷含解析，共12页。试卷主要包含了三组昆虫等内容，欢迎下载使用。
1．全卷分选择题和非选择题两部分，全部在答题纸上作答。选择题必须用2B铅笔填涂；非选择题的答案必须用黑色字迹的钢笔或答字笔写在“答题纸”相应位置上。
2．请用黑色字迹的钢笔或答字笔在“答题纸”上先填写姓名和准考证号。
3．保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，在草稿纸、试题卷上答题无效。
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1．下列叙述与所给的概念模型不相符的是（ ）
A．若该图表示能量流动，则E可表示羊摄入的能量，F可代表羊同化的能量，G、H可分别代表被下一营养级摄入的能量和羊粪便中的能量
B．若该图表示诱变育种，则E可表示诱变因素，F可代表处理材料，G、H可说明变异的不定向性
C．若该图表示无氧呼吸，则E可表示葡萄糖，F可代表丙酮酸，G可代表CO2和酒精，H可代表乳酸
D．若该图表示体液免疫，则E可表示抗原和淋巴因子，F可代表B细胞，G、H可分别代表浆细胞和记忆细胞
2．下列关于遗传病的叙述，正确的是（ ）
A．猫叫综合征为染色体数目变异引起的遗传病
B．选择放松会使各种遗传病的致病基因频率增加
C．多基因遗传病患者后代的发病率较单基因遗传病高
D．经基因治疗治愈的血友病患者，其后代仍有患病风险
3．在种子发育过程中，许多植物会储存大量的油脂。这些油积累在一种由内质网衍生而来的油质体中(如图所示)：下列说法错误的是（ ）
A．油质体内的油是植物的储能物质
B．油脂可被苏丹Ⅲ染液染为橘黄色
C．内质网是具有双层膜的细胞器
D．油质体中的油在两层磷脂分子之间积累
4．有关真核细胞的DNA复制和转录这两种过程的叙述，错误的是
A．两种过程都可在细胞核中发生B．两种过程都有酶参与反应
C．两种过程都以脱氧核糖核苷酸为原料D．两种过程都以DNA为模板
5．细胞是多种元素和化合物构成的生命系统，下列相关叙述，正确的是（ ）
A．C、H、O、N等化学元素是构成细胞中主要化合物的基础，在细胞中含量丰富
B．内环境中发生的丙酮酸氧化分解给细胞提供能量，有利于生命活动的进行
C．酶、激素、抗体和神经递质等都是细胞中的微量高效物质，作用后都立即被分解
D．同一生物体内不可能具有两种无氧呼吸方式的一系列酶
6．为研究森林生态系统的碳循环，对西黄松老龄（未砍伐50〜250年）和幼龄（砍伐后22年）生态系统的有机碳库及年碳收支进行测定，结果见下表。下列说法错误的是（ ）
*净初级生产力：生产者光合作用固定总碳的速率减去自身呼吸作用消耗碳的速率。
**异养呼吸：消费者和分解者的呼吸作用。
A．西黄松群落被砍伐后，可逐渐形成自然幼龄群落，体现了生态系统的恢复力稳定性
B．幼龄西黄松群落每平方米有360克碳用于生产者当年的生长、发育、繁殖，储存在生产者活生物量中
C．西黄松幼龄群落中每克生产者活生物量的净初级生产力小于老龄群落
D．根据年碳收支分析，幼龄西黄松群落不能降低大气碳总量
7．新冠肺炎是由COVID-19病毒（单链RNA病毒）引起的一种急性传染性疾病，下列叙述正确的是（ ）
A．人体感染COVID-19病毒后，在内环境中会迅速增殖形成大量的病毒
B．侵入人体内的COVID-19病毒会刺激T细胞分泌淋巴因子与该病毒结合
C．病毒为寄生生物，需要体液免疫和细胞免疫共同作用才能将其彻底清除
D．当人体再次感染COVID-19病毒，记忆细胞会迅速分泌抗体将其杀灭
8．（10分）下列关于元素和化合物的叙述正确的是（ ）
A．DNA和RNA属于核酸，都是细胞内的遗传物质
B．脂质存在于所有细胞中，是组成细胞的重要化合物
C．Mg是植物细胞中的微量元素，缺Mg可使叶片发黄
D．强酸、强碱、低温或高温都会使蛋白质变性失活
二、非选择题
9．（10分）某昆虫翅的颜色由常染色体上的两对基因（E和e、R和r）控制，当两种显性基因（E、R）同时存在时翅膀才表现出颜色，其余情况下均表现为无色。现有甲组（基因型eeRR）、乙组（基因型为EErr）和丙组（基因型为eerr）三组昆虫。
请回答下列问题：
（1）以上所述说明生物的性状与基因在数量上的对应关系是_______________________________。
（2）以上述三组昆虫为材料，请设计杂交实验来判断控制昆虫翅色的基因是否遵循自由组合定律。请写出实验思路，_______________________________。
（3）若控制昆虫翅色的基因遵循自由组合定律，已知昆虫翅色有黑色、灰色、无色三种类型，有色翅昆虫中存在黑翅和灰翅两种，两个显性基因（E、R）中有一个存在剂量效应，即有一个显性基因时为灰翅，有两个显性基因时为黑翅。为判断剂量效应的基因是E还是R，某小组用甲组与乙组昆虫杂交得F1，再将F1与甲组昆虫杂交，观察并统计子代的表现型及比例。
请预期该实验的结果及结论：
①若_______________________，则R为剂量效应基因；
②若_______________________，则E为剂量效应基因。
10．（14分）干种子萌发过程中，CO2释放量()和O2吸收量(Q。)的变化趋势如图所示（假设呼吸底物都是葡萄糖）。回答下列问题：
（1）种子在萌发过程中的0～12 h之间，需要吸收大量的水分，以 ___细胞代谢的速率。
（2）在种子萌发过程中的12～30h之间，细胞呼吸的方式有 ___，依据是_____。
（3）胚芽出土后幼苗的正常生长还需要吸收无机盐离子。研究发现，水稻幼苗吸收大量的SiO44-，而番茄幼苗几乎不吸收SiO44-，请设计实验对这种选择性进行验证，要求写出实验思路：____。
（4）实验结果表明植物对无机盐离子的吸收具有选择性，此特性与细胞膜上蛋白质的 ___密切相关。
11．（14分）人和哺乳动物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。如何有效分解尿素就成了某校生物研究性学习的课题，课题组成员欲从土壤中筛选能高效分解尿素的细菌。请回答下列问题：
（1）给农作物施用尿素，主要是为了给植物提供______________元素。为了筛选能分解尿素的细菌，在配制培养基时需要添加KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_______________________（答出两点即可）。
（2）要从土壤中分离分解尿素的细菌，必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有_____________________（至少答2种）。分离实验的关键思路是_____________________。
（3）为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，可以用____________（选择/鉴别）培养基，即在固体培养基中加入酚红试剂，菌落周围会出现_________________，该区域越大，表明该菌株利用尿素的能力_______________。
12．萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。
（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是一种定点的_________技术。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。
参考答案
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)
1、A
【解析】
细胞呼吸包括有氧呼吸和无氧呼吸，其中无氧呼吸分为产酒精的和产乳酸的无氧呼吸。
特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫。
【详解】
A、若该图表示能量流动，则摄入量分为同化量和粪便中的能量，A错误；
B、若该图表示诱变育种，则E可表示诱变因素，F可代表处理材料，可以突变为不同的等位基因，故G、H可说明变异的不定向性，B正确；
C、若该图表示无氧呼吸，则E可表示葡萄糖，F可代表丙酮酸，G可代表CO2和酒精，H可代表乳酸，表示不同途径的无氧呼吸，C正确；
D、若该图表示体液免疫，则E可表示抗原和淋巴因子，F可代表B细胞，G、H可分别代表浆细胞和记忆细胞，其中浆细胞可以分泌抗体，D正确。
故选A。
2、D
【解析】
1、一般认为，引起疾病的基因是有害的，称为“致病基因”。但随着基因技术研究的深入，我们又认识到基因也具有二重性。
2、多基因遗传病：
（1）概念：由两对以上等位基因控制的人类疾病。
（2）特点：①易受环境因素的影响；②在群体中发率较高；③常表现为家族聚集。
（3）实例：腭裂、无脑儿、青少年型糖尿病、原发性高血压等。
【详解】
A、猫叫综合征是染色体结构变异引起的遗传病，A错误；
B、选择放松造成有害基因的增多是有限的，B错误；
C、多基因遗传病涉及2对及以上基因，后代患病概率比单基因遗传病低，C错误；
D、基因治疗的对象是具有致病基因的体细胞，没有涉及原始性细胞，所以其后代仍有患病风险，D正确。
故选D。
本题知识点简单，考查基因治疗的相关知识，要求考生识记基因治疗的概念，明确基因治疗只是将健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，并不是把有缺陷的基因切除，也没有对有缺陷的基因进行修复，属于考纲识记和理解层次的考查。
3、C
【解析】
本题结合模式图，考查细胞结构和功能，重点考查细胞器的相关知识，要求考生识记细胞中各种细胞器的结构、分布和功能。内质网具有单层膜结构，其能有效地增加细胞内的膜面积，其外连细胞膜，内连核膜，将细胞中的各种结构连成一个整体，具有承担细胞内物质运输的作用。
【详解】
A、油质体内的油（脂肪）是植物的储能物质，A正确；
B、油脂主要成分是脂肪，脂肪可被苏丹III染液染为橘黄色，B正确；
C、由分析可知，内质网是具有单层膜的细胞器，C错误；
D、由图可知，油质体中的油在两层磷脂分子之间积累，D正确。
故选C。
4、C
【解析】
本题考查复制转录的知识，DNA主要分布在细胞核。
【详解】
A.DNA主要分布在细胞核，DNA的复制和转录主要发生在细胞核，A正确；
B.DNA复制需要解旋酶和DNA聚合酶，DNA转录需要RNA聚合酶，B正确；
C.DNA复制以脱氧核糖核苷酸为原料，转录以核糖核苷酸为原料，C错误；
D. DNA复制以DNA两条链为模板，转录以DNA其中一条链为模板，D正确；
答案选C.
5、A
【解析】
1、激素是由内分泌器官（或细胞）分泌对生命活动有调节作用的化学物质，激素调节的三个特点：微量和高效；通过体液运输；作用于靶器官、靶细胞。
2、酶是活细胞产生的具有催化作用的蛋白质（或RNA），具有高效性、专一性等特点。
3、神经递质由突触前膜释放后，作用于突触后膜的神经元，作用于相应的靶细胞。
4、抗体的化学本质为蛋白质，主要分布在血清中。
5、生命活动的主要承担者是蛋白质，其基本组成元素是C、H、O、N四种；脂质包括脂肪、磷脂和固醇，脂肪和固醇组成元素为C、H、O，磷脂是细胞膜的主要成分，其组成元素为C、H、O、N、P； 糖类只由C、H、O组成；核酸是遗传信息的携带者，由C、H、O、N、P五种元素组成。
【详解】
A、由分析可知，C、H、O、N等化学元素是构成细胞中主要化合物的基础，在细胞中含量丰富，A正确；
B、丙酮酸的氧化分解，在有氧存在时发生在线粒体中，在无氧时发生在细胞质基质中，B错误；
C、激素一经靶细胞接受并起作用后就被灭活了，神经递质与突触后膜上的特异性受体结合发生作用后立即被分解或被相应的细胞回收，酶是生物催化剂，发挥催化作用后不被灭活，抗体和抗原特异性结合后可形成沉淀或细胞集团，进而被吞噬细胞吞噬消化，C错误；
D、马铃薯块茎无氧呼吸产乳酸，其植株的叶片无氧呼吸产物为酒精，D错误。
故选A。
本题考查学生对元素和化合物的理解，要求考生把握知识的内在联系，形成知识网络，并结合题干信息进行推理、判断。
6、C
【解析】
表格表示的是对西黄松老龄(未砍伐50~250年)和幼龄(砍伐后22年)生态系统的有机碳库及年碳收支进行测定的结果，其中生产者活生物量老龄远远大于幼龄，其他的四个指标差距较小。
【详解】
A、生态系统的稳定性包括抵抗力稳定性和恢复力稳定性，西黄松群落被砍伐后，可逐渐形成自然幼龄群落，体现了生态系统的恢复力稳定性，A正确；
B、已知净初级生产力指的是生产者光合作用固定总碳的速率减去自身呼吸作用消耗碳的速率，因此表格数据显示，幼龄西黄松群落每平方米有360克碳用于生产者当年的生长、发育、繁殖，储存在生产者活生物量中，B正确；
C、根据表格数据分析可知，西黄松幼龄群落中每克生产者活生物量的净初级生产力大于老龄群落，C错误；
D、根据年碳收支分析，幼龄西黄松群落不能降低大气碳总量，D正确。
故选C。
7、C
【解析】
体液免疫和细胞免疫过程
1．体液免疫过程为：大多数病原体经过吞噬细胞等的摄取和处理，暴露出这种病原体所特有的抗原，将抗原传递给T细胞,刺激T细胞产生淋巴因子，少数抗原直接刺激B细胞，B细胞受到刺激后，在淋巴因子的作用下，开始一系列的增殖分化，大部分分化为浆细胞产生抗体，小部分形成记忆细胞。抗体可以与病原体结合，从而抑制病原体的繁殖和对人体细胞的黏附。
2.细胞免疫过程：抗原经吞噬细胞摄取、处理和呈递给T淋巴细胞，接受抗原刺激后T淋巴细胞悔增殖、分化产生记忆细胞和效应T细胞，效应T细胞与相应的靶细胞密切接触，进而导致靶细胞裂解死亡，抗原暴露出来，此时体液中抗体与抗原发生特异性结合形成细胞团或沉淀，最后被吞噬细胞吞噬消化。
【详解】
A、人体感染COVID-19病毒后，在细胞中会迅速增殖形成大量的病毒，A错误；
B、侵入人体内的COVID-19病毒经过吞噬细胞的摄取和处理后，吞噬细胞将抗原呈递给T细胞，T细胞接受抗原刺激后会增殖、分化为效应T细胞和记忆细胞，效应T细胞会与病毒寄生的宿主细胞密切接触，导致靶细胞裂解死亡，失去寄生场所的病毒被相应抗体特异性结合，而后会被吞噬、消灭，B错误；
C、病毒为胞内寄生生物，需要体液免疫和细胞免疫共同作用才能将其彻底清除，C正确；
D、当人体再次感染COVID-19病毒，记忆细胞会迅速增殖、分化出大量的浆细胞，浆细胞会分泌出大量的抗体将其消灭，D错误。
故选C。
8、B
【解析】
大量元素，是指植物正常生长发育需要量或含量较大的必需营养元素。一般指碳、氢、氧、氮、磷和钾6种元素。在正常生长条件下，这些元素的含量占植物干物质质量的1%以上。微量元素约有70种，指的是在人体中含量低于人体质0.01%~0.005%的元素包括铁、碘、锌、硒、氟、铜、钴、镉、汞、铅、铝、钨、钡、钛、铌、锆、铷、锗和稀土元素等。一般植物含镁量为干物质的0.05～0.7%。镁在植物体内属于移动性较强的元素，进入根系中柱的镁，通过木质部空间到达植物地上各器官。镁是叶绿素的主要成分，是植物体内的大量元素。
【详解】
A、DNA和RNA属于核酸，DNA是细胞内的遗传物质，A错误；
B、脂质包含脂肪、磷脂、固醇等，如磷脂是细胞膜的重要成分，因此脂质存在于所有细胞中，是组成细胞的重要化合物，B正确；
C、Mg是植物细胞中的大量元素，缺Mg可使叶片发黄，C错误；
D、强酸、强碱、或高温都会使蛋白质变性失活，低温不会，D错误。
故选B。
二、非选择题
9、一种性状可由多对基因控制 让多对甲组与乙组昆虫进行杂交得F1，将F1与丙组昆虫进行杂交（或F1自交）获得子代，观察并统计子代的表现型及比例。 黑色：灰色：无色=1：1：2 灰色：无色=1：1
【解析】
基因与性状之间不是简单的线性关系，性状可能是由一或多对基因控制的。由题意可知E-R-为翅膀有色，eeR-、E-rr、eerr表现为翅膀无色。
【详解】
（1）根据“某昆虫翅的颜色由常染色体上的两对基因（E和e、R和r）控制”，可说明生物的性状与基因在数量上的对应关系为：一种性状可由多对基因控制。
（2）若判断两对基因是否遵循自由组合定律，可让双杂合子自交或测交，看后代是否出现9∶3∶3∶1或1∶1∶1∶1或其相关的变式比例，所以可让多对甲组（eeRR）与乙组（EErr）昆虫进行杂交得F1（EeRr），将F1与丙组（eerr）昆虫进行杂交（或F1自交）获得子代，观察并统计子代的表现型及比例。根据“当两种显性基因（E、R）同时存在时翅膀才表现出颜色，其余情况下均表现为无色”，所以上述测交后代若为翅膀有色E-R-∶翅膀无色（eeRr+Eerr+eerr）=1∶3，可推测EeRr产生了四种数量相等的配子，即两对基因遵循自由组合定律（或F1自交后代为有色∶无色=9∶7，也说明EeRr产生了四种数量相等的配子，即两对基因遵循自由组合定律）。
（3）①若控制昆虫翅色的基因遵循自由组合定律，甲组与乙组昆虫杂交得F1（EeRr），再将F1与甲组（eeRR）昆虫杂交，后代基因型及比例为EeRR∶EeRr∶eeRR∶eeRr=1∶1∶1∶1，根据题意“有一个显性基因时为灰翅，有两个显性基因时为黑翅”，若R为剂量效应基因，则EeRR为黑翅，EeRr为灰翅，eeRR和eeRr均为无色，即杂交后代黑色∶灰色∶无色=1∶1∶2。
②若E为剂量效应基因，则EeRR和EeRr均表现灰翅，eeRR和eeRr均为无色，即杂交后代为灰色：无色=1：1。
本题考查自由组合定律的实质和应用，意在考查考生对两对等位基因杂交后代基因型和表现型的判断。
10、加快 有氧呼吸和无氧呼吸 CO2的释放量多于O2的吸收量 配制（适宜浓度的）含SiO42-的（完全）培养液，将（等量的生长发育状况相同的）番茄幼苗和水稻幼苗分别放在该培养液中培养。一段时间后检测培养液中SiO42-剩余量 种类和数量
【解析】
种子萌发过程中吸水后代谢加快，根据有氧呼吸反应式：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；和无氧呼吸反应式：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量，可知当种子只进行有氧呼吸时，CO2释放量和O2吸收量相等，当种子只进行无氧呼吸时，不吸收氧气，只释放二氧化碳，当种子既进行有氧呼吸又进行无氧呼吸时，CO2释放量大于O2吸收量。
【详解】
（1）细胞中的自由水含量越多，细胞代谢越旺盛，因此种子在萌发过程中的0~12h之间，吸收了大量的水分，细胞代谢的速率加快。
（2）在种子萌发过程中的12~ 30h之间，依据CO2的释放量多于O2的吸收量，可判断细胞呼吸的方式是有氧呼吸和无氧呼吸。
（3）验证水稻幼苗和番茄幼苗对SiO44-吸收的偏好性，可以将（等量的生长发育状况相同的）番茄幼苗和水稻幼苗分别放在含SiO44-的培养液中培养，一段时间后检测培养液中SiO44-剩余量。
（4）植物对无机盐的吸收具有选择性，与细胞膜上蛋白质的种类和数量密切相关。
本题考查种子萌发过程中的细胞呼吸方式和对无机盐的吸收，意在考查考生根据图像判断细胞呼吸的方式和具有实验的设计分析能力。
11、氮 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH 高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌 用尿素为唯一氮源的培养基选择培养 鉴别 红色 越强
【解析】
1、实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌（如接种环）、干热灭菌（如培养皿）、高压蒸汽灭菌（如培养基）等。
2、可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，使指示剂变为红色。
【详解】
（1）尿素中含N元素，给农作物施用尿素，主要是为了给植物提供氮元素。为了筛选能分解尿素的细菌，在配制培养基时需要添加KH2PO4 和Na2HPO4，其作用有为细菌生长提供无机营养，同时还可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH。
（2）用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等都必需是无菌的，常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。要从土壤中分离目标菌（能高效分解尿素的细菌），关键的实验思路是：用尿素为唯一氮源的培养基选择培养，在该培养基上不能合成脲酶的微生物无法分解尿素获取氮源，生长受到抑制。
（3）分解尿素的细菌产生的脲酶催化尿素分解生成氨，使pH值上升，酚红试剂在碱性条件下由无色变红色，菌落周围出现红色环。因此，为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入酚红试剂，该培养基为鉴别培养基，若菌落周围出现红色环，可以初步鉴定该种细菌为目标菌。菌落周围的红色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。
本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记土壤中分解尿素的细菌的分离原理，掌握相关实验原理和操作，再结合所学的知识准确答题。
12、限制酶和DNA连接 CaCl2 基因突变
含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒） 抗原-抗体杂交 抑菌圈 对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高
【解析】
（一）基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E•cliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E•cliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”——载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
3、PCR技术扩增目的基因
（1）原理：DNA双链复制
（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞
1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2、常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有基因枪法和 花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。
2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。
3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。
4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
【详解】
（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。
（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。
②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：
（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用抗原——抗体杂交方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较抑菌圈的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，是因为蛋白A基因的发酵产物对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高。
本题主要考查基因工程、PCR技术等相关知识，考生需要理解和记忆相关知识，并学会应用所学知识正确答题。
西黄生态系统
碳量
生产者活生物量（g/m2）
死有机质
（g/m2）
土壤有机碳（g/m2）
净初级生产力*（g/m2·年）
异养呼吸**（g/m2·年）
老龄
12730
2560
5330
470
440
幼龄
1460
3240
4310
360
390
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√
引物A
引物B
引物C
引物D
PCR1
√
√
×
×
PCR2
×
×
√
√
PCR3
×
×
×
×
PCR4
√
×
×
√