人教版 (2019)选择性必修3动物细胞融合技术与单克隆抗体优质课件ppt

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1、掌握动物细胞融合技术2、阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程
重点：单克隆抗体的制备过程难点： 单克隆抗体的制备过程
指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
3、融合细胞（也叫杂交细胞）的特点：
具有两个或多个细胞的遗传信息，通过动物细胞的培养，杂交细胞表现出亲本的特点。
4、诱导动物细胞融合的常用方法：
化学法：聚乙二醇（PEG)融合法
生物法：灭活病毒诱导法
19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？
病人体内病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
动物细胞融合技术的过程：（灭活病毒诱导法）
灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
2、灭活病毒诱导细胞融合的原理
病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
灭活的病毒颗粒粘附于细胞表面
细胞核融合形成杂交细胞
在病毒的作用下，使细胞互相凝聚
5、动物细胞融合的意义（主要目的）：
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。至今种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得了成功。
6、动物细胞融合的应用：
（1）成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。（2）特别是利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
1、利用细胞融合进行基因定位
已知人的体细胞和小鼠的体细胞(2N=40)杂交(融合)后，杂种细胞在有丝分裂过程中，人的染色体逐渐地丢失，最后仅保留少数几条。由于人染色体的丢失是随机的，因此不同的杂种细胞会保留不同的人染色体。
人胸苷激酶基因位于17号染色体上
2、比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
细胞膜的流动性细胞的全能性
去除细胞壁后诱导原生质体融合
使细胞分散后诱导细胞融合
物理法（电、离）化学法（聚、高）
电融合法、PEG融合法、灭活病毒诱导法
产量低、纯度低，而且特异性差。
2.单克隆抗体的制备：
（1）大量制备单一抗体的思路：
（2）存在的问题：B淋巴细胞不可能无限增殖。
（产生抗体的B淋巴细胞是高度分化的细胞，体外培养不增殖）
骨髓瘤细胞（能无限增殖）
一个B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）
杂交瘤细胞：既能迅速大量增殖，又能产生特异性抗体
3.单克隆抗体的制备过程
用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。
将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合
用特定的选择培养基进行筛选:未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
（既可以大量增殖，又能产生抗体）
对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够量的能分泌所需抗体的细胞。
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能与特定抗原结合）
对抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。
从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。