人教版 (2019)选择性必修3重组DNA技术的基本工具教课ppt课件

这是一份人教版 (2019)选择性必修3重组DNA技术的基本工具教课ppt课件，共46页。PPT课件主要包含了抗虫基因，棉花细胞，含抗虫基因，培育抗虫棉的简要过程，基因工程实例，基因工程的概念，操作对象，操作水平，重组DNA技术，分子水平等内容，欢迎下载使用。
与载体DNA拼接，导入
基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。
赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品
1、不同生物的基因为什么能拼接？
2、外源基因为什么能在受体细胞中表达？
(1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(2)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。
(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心法则。(3)生物界共用一套遗传密码。相同的遗传信息在 不同的生物体内表达出相同的蛋白质。
基因工程诞生的理论基础
“工欲善其事，必先利其器”。在培育转基因番木瓜时，既要在体外对含有所需基因的DNA分子“切割”、改造和“拼接”；又要将重组DNA分子导入番木瓜体内，并使其表达。
DNA分子极小，实现这些精确操作需要哪些“分子工具”呢？
番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵袭。当番木瓜被这种病毒感染后，产量会大大下降。科学家通过精心设计，用“分子工具”培育出了转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒。 DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。那么，科学家究竟用到了哪些“分子工具”？这些“分子工具”各具有什么特征呢？
转基因番木瓜(左）与非转基因番木瓜(右）
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
主要是从原核生物中分离纯化出来的。
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如，一种限制酶是从大肠杆菌( Escherichia cli)的R型菌株分离来的，就用字母EcR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcRI。
DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——_________和_______
当限制酶在它识别序列的___________将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是__________；当限制酶在它识别序列的_________切开时，产生的是______；
实例1—EcRⅠ限制酶： 识别序列为GAATTC， 切割部位为GA之间的磷酸二酯键。
实例2——SmaⅠ限制酶： 识别序列为CCCGGG 切割部位为CG之间的磷酸二酯键。
课堂练习：写出下列限制酶切割形成的黏性末端BamHⅠ____ EcRⅠ___HindⅢ___ BglⅡ ___
思考：你从中发现什么现象了？
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端
你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗？
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身安全。 所以，简单来说：限制酶在原核生物中起到的作用为： 切割外源DNA、使之失效，以保证自身安全
试推测限制酶为什么不会切割自身的DNA？
原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰
二、分子缝合针—DNA连接酶
将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。
DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？
A A T T G
催化单个核苷酸加到已有核苷酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键
催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
催化形成与模板链互补的DNA链，形成新的双链DNA分子
催化具有互补黏性末端或平末端的DNA片段连接起来，形成重组DNA分子
①化学本质都是蛋白质②都是催化形成磷酸二酯键
DNA连接酶和DNA聚合酶功能比较
只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，不能连接具有平末端的DNA片段
既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端（但连接平末端的效率相对较低）
三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
将外源基因送入受体细胞
质粒、噬菌体和动植物病毒等。
将外源基因导入大肠杆菌等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
3.作为载体需具备的条件
（1）有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中。
（2）能在细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。
（3）常有特殊的标记基因（如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等），便于重组DNA分子的筛选。
利用标记基因进行筛选示例：
4.最常用的运载体——质粒
（1）质粒的化学本质：
质粒是一种____的、结构简单的、独立于______________或_______________之外，并具有自我复制能力的____________分子
（2）基因工程中使用质粒的特点：
在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是天然质粒的基础上进行过_________的；这些质粒上常有特殊的标记基因，便于__________________；
1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？
剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。
2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对?如果不能，可能是什么原因造成的？
如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。
3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？
不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上。
（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
（2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2ml/L NaCl溶液。
（3）在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等
不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA
①研磨液②体积分数为95%的酒精③2ml/L 的NaCl溶液④二苯胺试剂⑤蒸馏水
含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl
鉴定DNA，要现配现用
预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
NaCl溶液溶解DNA并鉴定
抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
2.过滤或离心取上清液：
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖等杂质
②低温放置几分钟的作用：
3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；
或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。
搅拌时应轻缓、并沿一个方向：
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定
取两支20mL的试管，各加入2ml/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。
2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。
3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。
本实验可以采取分组的方式进行。可以选取不同的实验材料；也可以查阅资料了解其他提取DNA的方法，对同种材料采用不同的方法。最后从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。