人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》DNA的粗提取与鉴定复习ppt课件

这是一份人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》DNA的粗提取与鉴定复习ppt课件，共29页。PPT课件主要包含了不同浓度的NaCl，盐浓度，二苯胺，DNA，蛋白质，℃以上，细胞膜，DNA的溶解度，DNA含量相对较高，实验设计等内容，欢迎下载使用。
1．通过阅读教材，能准确说出DNA的理化特性及提取和鉴定的原理；2．通过观看实验视频，初步学会DNA粗提取和鉴定方法，知道相关溶液的作用机理。
1.DNA在0.14 ml/L NaCl溶液中溶解度最低。 2．DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋 白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋 白质分开。3．DNA对蛋白酶、高温和洗涤剂有耐受性。4．在加热条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。5．哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，不能作为提取DNA实验材料。若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。6．实验中加入柠檬酸钠作用：作为抗凝剂，防止血液凝固。
1．原理 (1)DNA和蛋白质等其他成分在 溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的 就能使DNA充分溶解，而使 沉淀，或者相反，以达到分离目的。
DNA粗提取、分离与鉴定的原理
(3)DNA的鉴定：DNA＋ 。
(2)DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，这样可将DNA和蛋白质进一步分离。
2．DNA的耐受性 (1)蛋白酶不能水解 ，能水解 。 (2)DNA在 变性，大多数蛋白质在 就可以变性。 (3)洗涤剂不能分解 ，但可以瓦解 。
如何将DNA进一步提纯？提纯后是否能得到纯净的DNA? 提示：利用DNA不溶于冷酒精，而蛋白质溶于冷酒精的原理进一步提纯DNA。提纯后的DNA中仍含有一定量杂质。
[例1] 关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验，该实验依据的实验原理不是 (　　)A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，随着NaCl溶液浓度的不同而不同B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂D．在沸水中DNA遇二苯胺会出现蓝色反应
[解析]　本实验依据的原理是A、B、D项三个方面。必须明确的是NaCl的浓度为0.14 ml/L时，DNA的溶解度最小，具体操作时用2 ml/L的NaCl溶液，再加水稀释至黏稠物(主要是DNA)不再增多时，此时该溶液浓度即为0.14 ml/L。C项是DNA的性质，不能作为该实验的原理。 [答案]　C
(1)甲基绿染色法：DNA＋甲基绿染液―→绿色。 (2)紫外灯照射法：用蒸馏水配制质量分数为0.05%的溴化乙锭(EB)溶液，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹到蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中)，可呈现橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处)。 (3)电泳法：此方法适合鉴定纯度较高的DNA。
原则：选用 的生物组织
实例：鸡血细胞、花椰菜
（2）破碎细胞，提取含DNA的滤液
动物细胞：在鸡血细胞液中加入一定量 ，搅拌、过滤后，收集滤液
植物细胞：用 溶解细胞膜
（3）去除滤液中的杂质
方案一：通过控制 的浓度去除杂质
方案二：直接在滤液中加入 ，反应10-15min，其中的 酶能够分解蛋白质
方案三：将滤液放在 的恒温水浴箱中保温10-15min
（4）DNA的析出与鉴定
在滤液中加入同体积、冷却的 溶液（体积分数为95％）
（2-3min）
溶液中出现
用 搅拌，卷起 ，并吸去水分。
一支试管只加物质的量浓度为 的NaCl溶液5mL
一支试管中加 和物质的量浓度为2ml/L的 溶液5mL
试剂：
条件：在沸水中加热
结果：溶解有DNA的溶液
1．可否选用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，为什么？提示：不可以，因为哺乳动物成熟红细胞无细胞核。2．提纯时，为什么要选用体积分数为95%的冷酒精？提示：冷酒精提纯效果更好。
1．实验材料的选取 (1)鸡血适宜作为实验材料的两个原因：一是因为鸡血细胞核中的DNA含量丰富，材料易得；二是因为鸡血细胞易吸水涨破。 (2)材料的处理(以鸡血为例)：
2.实验过程中的几点注意事项 (1)两次使用蒸馏水的作用：第一次用蒸馏水是使鸡血细胞吸水涨破，提取核DNA；第二次用蒸馏水稀释NaCl溶液，使DNA析出。 (2)实验中三次过滤操作的比较：
(3)用玻璃棒搅拌时，动作要缓慢且沿同一方向进行，目的是防止DNA被破坏。 (4)实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，可减少提取过程中DNA的损失。 3．结果分析及评价 (1)现象是否明显及可能原因： 若实验结果不明显，可能的原因是： ①材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。 ②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。
③二苯胺最好现配现用，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。 ④析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水要沿烧杯内壁慢慢地加入，不能一次快速加入，否则会影响实验结果。 ⑤实验中有多次搅拌，但是其目的及操作方法是不同的，要注意区分，否则也会影响结果。 (2)分析DNA中的杂质： 本实验提取的DNA粗制品中有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。
[特别提醒]①若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。②柠檬酸钠的作用是作为抗凝剂，防止血液凝固。③吸去上清液的原因是DNA主要存在于细胞核中。
[例2] 某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20 ℃、另一组置于－20 ℃条件下保存24 h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。
第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6支试管，分别加入等量的2 ml/L NaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：
注：“＋”越多表示蓝色越深。分析上述实验过程，回答下列问题：(1)该探究性实验的课题名称是_____________________。(2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少________。
(3)根据实验结果，得出结论并分析。①结论1：与20 ℃相比，相同实验材料在－20 ℃条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：_________________________________________。②针对结论1，请提出合理的解释： 。(4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是：_______________________________，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。
[解析]　如果DNA断裂，就不容易被提取出来；温度主要是通过影响酶的活性来影响生理过程。粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白质，可以通过氯仿的特殊功能来去除蛋白质，提高DNA纯度。 [答案]　(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响　(2)DNA断裂 (3)①等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的DNA量最多 ②低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速度慢 (4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清液