2025年高考第二次模拟考试卷：生物（云南卷）（解析版）

这是一份2025年高考第二次模拟考试卷：生物（云南卷）（解析版），共22页。试卷主要包含了细胞周期蛋白依赖性激酶，果蝇红眼，苯丙酮尿症是由PAH基因等内容，欢迎下载使用。
注意事项：
1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号等填写在答题卡和试卷指定位置上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回
选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1．“红伞伞、白杆杆”是人们对云南毒蘑菇毒蝇伞的描述，其含有的主要毒素鹅膏蕈 碱是一种双环状肽，结构如图。下列说法正确的是（ ）
A．鹅膏蕈碱是一种双环状八肽
B．除R基外，鹅膏蕈碱至少含有一个游离的氨基和一个游离的羧基
C．鹅膏蕈碱经高温处理后不能与双缩脲试剂产生紫色反应
D．氨基酸形成鹅膏蕈碱的过程中，相对分子质量减少了144
【答案】A
【分析】蛋白质与双缩脲试剂反应呈紫色。
【详解】A、鹅膏蕈碱是一种环状八肽，其分子中含有的肽键数=氨基酸数=8个，A正确；
B、化学结构中除R基外，至少含有0个游离的氨基和0个游离的羧基，B错误；
C、高温加热后的鹅膏蕈碱肽键没有被破坏，仍可以与双缩脲试剂发生紫色反应，C错误；
D、鹅膏蕈碱是一种环状八肽，其分子中含有的肽键数=氨基酸数=8个=水分子个数，相对分子质量减少了188=144，但是该多肽内部两个氨基酸的R基连接在一起需要去掉两个H，因此氨基酸形成鹅膏蕈碱的过程中，相对分子质量减少应大于144，D错误。
故选A。
2．人体内血液中的铁大部分来源于衰老的红细胞，巨噬细胞吞噬、降解红细胞后，获得的Fe2+通过巨噬细胞膜上的铁输出蛋白（FPN1）进入血液，用于骨髓生成新的红细胞。肝脏分泌的铁调素（Hepc）可与FPN1结合，促进FPN1内化和降解，进而降低血液中Fe2+的含量。在炎症病人的尿中Hepc含量明显升高，HepcnRNA的水平也明显上升。下列叙述错误的是（ ）
A．衰老的红细胞被吞噬需要膜蛋白的参与
B．炎症可能会减少红细胞生成，进而导致贫血
C．敲除Hepc编码基因，巨噬细胞会出现铁积累
D．Hepc作为一种信息分子作用于特定的靶细胞
【答案】C
【分析】蛋白质是生命活动的主要承担者，具有运输、调节、免疫、催化、组成化合物结构等功能。
【详解】A、细胞衰老是一种正常的生命现象，衰老的红细胞被巨噬细胞的膜蛋白识别后才能进行吞噬，A正确；
B、炎症病人尿中Hepc含量及Hepc mRNA水平明显上升，会促进FPN1内化和降解，降低血液中含量，可能减少红细胞生成，进而导致贫血，B正确；
C、巨噬细胞吞噬、降解红细胞后，获得的Fe2+通过巨噬细胞膜上的铁输出蛋白（FPN1）进入血液，用于生成新的红细胞，肝脏分泌的铁调素（Hepc）可与FPN1结合，促进FPN1内化和降解，进而降低血液中Fe2+的含量，敲除Hepc编码基因，巨噬细胞不会出现铁积累，C错误；
D、Hepc作为一种信息分子，能与特定的靶细胞（如巨噬细胞）上的受体结合发挥作用，D正确。
故选C。
3．盐胁迫响应信号通路SOS途径是植物耐受胁迫的重要防御通路，下图是耐盐植物根细胞参与抵抗盐胁迫的部分结构示意图，下列有关叙述正确的是（ ）
A．进入细胞和进入液泡的方式分别是主动运输和协助扩散
B．泵数量不足或功能减弱使细胞质基质中的浓度降低
C．在高渗环境中细胞膜上的SOS1有利于维持植物根细胞高渗透压，增强细胞吸水能力
D．耐盐植物根细胞的细胞质基质与细胞液、细胞膜外的pH差异主要由泵维持
【答案】D
【分析】小分子物质跨膜运输的方式包括：自由扩散、协助扩散、主动运输。自由扩散高浓度到低浓度，不需要载体，不需要能量；协助扩散是从高浓度到低浓度，不需要能量，需要载体；主动运输从高浓度到低浓度，需要载体，需要能量。大分子或颗粒物质进出细胞的方式是胞吞和胞吐，不需要载体，消耗能量。
【详解】A、细胞外和液泡内的pH低于细胞质基质，（细胞外和液泡内的H+浓度更高），转运蛋白SOS1将H+运入细胞是顺浓度梯度（为协助扩散），钠离子出细胞的方式为主动运输，钠离子进入细胞的方式为协助扩散；NHX将H+运出液泡是顺浓度梯度（为协助扩散），NHX运输是利用H+浓度运输势能的主动运输，故钠离子通过主动运输的方式进入液泡，A错误；
B、泵数量不足或功能减弱导致膜两侧的氢离子浓度差减小，使细胞质基质中的不能运出细胞、不能运入液泡，最终导致细胞质基质中的Na+浓度升高，B错误；
C、据图可知，NHX可提高液泡中Na⁺浓度，提高细胞液渗透压，增强细胞吸水能力，增强抗盐胁迫能力，C错误；
D、由题图可知，H+一ATP泵运输H+进入液泡时，以及将细胞质基质的H+运输到细胞膜外需要消耗ATP，故为主动运输，因此耐盐植物根细胞的细胞质基质与细胞液、细胞膜外的pH差异主要由泵维持，D正确。
故选D。
4．下图表示某生物组织离体培养时，单位时间O2的吸收量和CO2释放量的变化，下列说法正确的是（ ）
A．CO2释放量最低点时释放的能量最少
B．培养动物细胞不会得到上述两条曲线
C．无氧呼吸消失时对应的氧气浓度是有氧呼吸的最适氧浓度
D．该曲线是通过逐渐增加离体组织培养液中O2浓度得到的
【答案】B
【分析】在无氧的条件下(O点)，生物体只能进行无氧呼吸，且产物是酒精和CO2。氧气浓度为10%时，该生物体只进行有氧呼吸。
【详解】A、无氧呼吸只在第一阶段释放少量的能量，CO2释放量最低点既进行有氧呼吸，又进行无氧呼吸，释放的能量比只进行无氧呼吸释放的能量多，A错误；
B、动物细胞无氧呼吸的产物是乳酸，因此不会存在上述两条曲线，B正确；
C、无氧呼吸消失时对应的氧气浓度是10%，图中氧气浓度10%时，随着氧气浓度的增加，有氧呼吸的强度继续增加，因此无氧呼吸消失时对应的氧气浓度不是有氧呼吸的最适氧浓度，C错误；
D、该曲线是在不同的氧气浓度下测得的O2吸收量与CO2释放量的变化，是一系列的氧气浓度下测得，而不是逐渐增加离体组织培养液中O2浓度得到的，D错误。
故选B。
5．下列关于酶和ATP的叙述中，错误的有几项（ ）
①不宜采用淀粉酶催化淀粉的水解反应来探究pH对酶活性的影响
②T4DNA连接酶可以连接平末端和黏性末端仍可说明酶具有专一性
③酶能降低化学反应的活化能，因此酶具有高效性
④酶和ATP都至少含有C、H、O、N四种元素
⑤细胞膜上某些催化ATP水解的酶可能同时具有转运离子的功能
⑥酶促反应需要适宜的条件，因此酶只能在生物体内发挥催化作用
⑦酶的合成过程中，一般伴随ATP的水解反应
A．一项B．二项C．三项D．四项
【答案】B
【分析】1、酶是由活细胞产生的具有催化作用的有机物，绝大多数酶是蛋白质，极少数酶是RNA。酶的特性：高效性、专一性和作用条件温和的特性。
2、ATP元素组成：ATP由C、H、O、N、P五种元素组成。结构简式A-P～P～P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基团，水解时远离A的特殊的化学键断裂，为新陈代谢所需能量的直接来源。
【详解】①因为盐酸能催化淀粉水解，所以不可用淀粉酶催化淀粉的反应，探究pH对酶活性的影响，①正确；
②酶的专一性是指一种酶只能催化一种或一类化学反应，T4DNA连接酶可以连接平末端和黏性末端仍可说明酶具有专一性，②正确；
③酶具有高效性是指与无机催化剂相比，酶降低化学反应活化能的效果更显著，③错误；
④酶的本质是蛋白质或RNA，与ATP都至少含有C、H、O、N四种元素，④正确；
⑤细胞膜上某些催化ATP水解的酶可能同时具有转运离子的功能，如质子泵兼有催化和运输功能，⑤正确；
⑥适宜条件下，酶在体内外都可发挥催化作用，⑥错误；
⑦酶的合成过程需要消耗能量，一般伴随着ATP的水解进行，⑦正确。
故选B。
6．细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK1）被激活后，可推动处于分裂前间期的细胞进入分裂期。CDK1的活性受到细胞周期蛋白（CyclinB）的调控，其激活过程如下图所示，“P’表示磷酸化。下列叙述错误的是（ ）
A．与CyclinB结合后，CDK1的构象发生变化
B．CDK1被激活后可能会促进染色体和纺锤体形成
C．若添加CyclinB抑制剂，可使细胞停留在分裂间期
D．CDK1的激活需要经过同一部位的去磷酸化和磷酸化过程
【答案】D
【分析】细胞周期的概念：连续分裂的细胞，从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时为止。
1、G1期：DNA合前期，合成RNA和核糖体；
2、S期：DNA复制期，主要是遗传物质的复制，即DNA、组蛋白和复制所需要酶的合成；
3、G2期：DNA合成后期，有丝分裂的准备期，主要是RNA和蛋白质（包括微管蛋白等）的大量合成；
4、M期：细胞裂期，暂离细胞周期，停止细胞裂执行定物功能，细胞所处期G0期。
【详解】A、由图可知，CDK1在无活性时与Cyclin B结合后，构象发生变化，变为部分激活状态，A正确；
B、CDK1被激活后可推动处于分裂前间期的细胞进入分裂期，而在细胞分裂期会发生染色体和纺锤体的形成等过程，所以CDK1被激活后可能会促进染色体和纺锤体形成，B正确；
C、因为CDK1的活性受到Cyclin B的调控，若添加CyclinB抑制剂，会抑制CDK1的激活，从而使细胞停留在分裂间期，C正确；
D、从图中可以看出，CDK1的激活是先在某个部位磷酸化，然后在另一个部位磷酸化，而不是同一部位的去磷酸化和磷酸化过程，D错误。
故选D。
7．果蝇红眼（D）对白眼（d）为显性，控制眼色的基因位于X染色体上。科研人员用白眼雌蝇和红眼雄蝇杂交，F1中不仅有红眼雌蝇和白眼雄蝇，还出现了少量占比相等的红眼雄蝇和白眼雌蝇。已知果蝇受精卵含1条Ⅹ染色体发育为雄性，含2条Ⅹ染色体发育为雌性；若X染色体多于2条或不含X染色体时无法正常发育。染色体数目异常的卵细胞可参与受精，染色体数目异常的精子不参与受精。产生的受精卵总数用B表示，其中染色体数目异常的受精卵数用A表示。下列说法错误的是（ ）
A．F1中性染色体组成为Y、XXX的受精卵无法正常发育
B．F1红眼雄蝇的性染色体为XD，其母本减数分裂产生了不含性染色体的卵细胞
C．F1白眼雌蝇的性染色体为XdXdY，可能是由于母本MⅡ过程中姐妹染色单体没有分开
D．F1中性染色体组成为XY的果蝇占比是（B-2A）/(2B-A)
【答案】D
【分析】根据题意可知，该果蝇的X染色体数量等于染色体组数时为雌性，即XXY为雌性，性染色体组成为XY或XO（O表示无X染色体）时为雄性，受精卵中X染色体多于2条或不含X染色体时，受精卵无法正常发育，即XXX和OY不能发育。
【详解】A、已知果蝇受精卵若X染色体多于2条或不含X染色体时无法正常发育，所以F1中性染色体组成为Y（不含X染色体）、XXX（X染色体多于2条）的受精卵无法正常发育，A正确；
B、亲本为白眼雌蝇（XdXd）和红眼雄蝇（XDY），正常情况下子代红眼雌蝇为XDXd，白眼雄蝇为XdY ，F1红眼雄蝇的性染色体为XD，说明其母本减数分裂产生了不含性染色体的卵细胞，与父本含XD的精子结合，形成XDO的个体，B正确；
C、F1白眼雌蝇的性染色体为XdXdY，可能是由于母本MI过程中同源染色体没有分开，或者MⅡ过程中姐妹染色单体没有分开，都移向了一极，产生了含XdXd的卵细胞，与父本含Y的精子结合形成，C正确；
D、若产生的异常卵细胞为XdXd或不含X染色体的（记为O），则与XDY产生的精子XD、Y结合形成的受精卵和比例为1/4XDXdXd（染色体数异常、且不能发育）、1/4XDO（染色体数异常）、1/4XdXdY（染色体数异常）、1/4OY（染色体数异常、且不能发育），已知亲本产生的受精卵总数用B表示，其中染色体数目异常的受精卵数用A表示，则染色体数正常的个体（XDXd、XdY）为B-A，又由于XDXd和XdY的比例相同，因此性染色体组成为XY的果蝇个体数目为1/2（B-A），存活的受精卵为（B-A/2），故子代中性染色体组成为XY的果蝇个体数目的占比是1/2（B-A）/（B-A/2）=（B-A）/（2B-A），D错误。
故选D。
8．苯丙酮尿症是由PAH基因（编码苯丙氨酸羟化酶）异常引起的遗传病。图1示PAH基因两侧限制酶MspI的酶切位点分布存在两种形式，图2为某家庭的遗传系谱图，为确定未出生的④号胎儿是否患该病，提取该家庭所有成员的DNA经MspI酶切后电泳分离，将含PAH基因的片段进行电泳，结果如图3所示。下列叙述正确的是（ ）
A．PAH基因发生碱基对的增添而导致基因突变
B．②号个体19Kb片段中含有正常的PAH基因
C．推测④号个体PAH基因纯合的概率为0
D．PAH基因通过控制蛋白质的结构直接控制性状
【答案】B
【分析】根据题意和图2分析可知：③为患病女孩，而其父母正常，说明苯丙酮尿症属于常染色体隐性遗传病。①、②、③号分别为杂合子、杂合子、隐性纯合子。
【详解】A、由题干信息可知，苯丙酮尿症是由PAH基因（编码苯丙氨酸羟化酶）异常引起的遗传病，但不能确定是否发生碱基对的增添，A错误；
B、由图2可知，父母正常，③为患病女孩，说明苯丙酮尿症属于常染色体隐性遗传病，且③号为隐性纯合子，所以③号个体体内含有两条23Kb的DNA条带，都是异常隐性PAH基因，一条来自①号个体，一条来自②号个体，②号个体体内含有的23Kb的DNA条带一定含有异常隐性PAH基因，则19Kb的DNA条带就含有正常PAH基因，B正确；
C、由图3可知，④号个体含有的19Kb的DNA条带来自②号，且含有正常的基因，而另一条23Kb的DNA条带应该来自①号个体，所以可能含有异常隐性PAH基因，也可能含有正常PAH基因，因此④号个体可为显性纯合子或杂合子，概率各占1/2，C错误；
D、PAH基因编码苯丙氨酸羟化酶，是通过控制酶的合成来控制代谢过程，进而控制性状，而不是控制蛋白质的结构直接控制性状，D错误。
故选B。
9．小鼠基因Avy是由基因A甲基化而来，A和Avy基因表达能合成黄色色素，a基因表达能合成黑色色素。为研究基因的甲基化遗传，某研究员以不同甲基化程度的Aa与aa进行了杂交，子代（除aa外）个体数n及各表型所占比例如下图。下列分析错误的是（ ）
A．A甲基化程度有个体差异，甲基化会抑制基因的转录
B．自变量是Aa作父本或作母本，因变量是子代表型
C．甲基化程度不同的父本，子代性状没有显著的差异
D．A甲基化影响个体性状，而且可通过母本遗传给后代
【答案】B
【分析】表观遗传是指DNA序列不发生变化，但基因的表达却发生了可遗传的改变，即基因型未发生变化而表现型却发生了改变，如DNA的甲基化，甲基化的基因不能与RNA聚合酶结合，故无法进行转录产生mRNA，也就无法进行翻译，最终无法合成相应蛋白，从而抑制了基因的表达。
【详解】A、从图中可以看出，即使亲本都是Avya，子代中黄色和黑色的比例也有所不同，说明Avy甲基化程度有个体差异。由于Avy和A基因能合成黄色色素而出现黑色个体，可以推测甲基化会抑制基因的转录，导致基因不能正常表达合成黄色色素，A正确；
B、实验中改变的因素Avya是作为父本还是母本，观察的子代的表型及比例，所以说自变量Avya是作为父本或母本，因变量是子代表型及比例，B错误；
C、对比图中不同杂交组合，可以发现甲基化程度不同的母本杂交子代中性状有显著差异，而甲基化程度不同的父本子代性状没有有显著差异，C正确；
D、从图中可以看出，当Avya作为母本时，子代的表型及其比例与Avya作为父本时不同，说明Avy甲基化影响个体性状，而且可以通过母本遗传给后代，D正确。
故选B。
10．下图为针对某病毒开发的有效mRNA疫苗在进行接种时，引发机体特异性免疫的过程示意图。已知体外环境转录的未修饰的mRNA被树突状细胞识别后，炎症介质释放并激活血管反应，血浆蛋白渗出到损伤因子所在部位，进而引起炎症部位水肿。下列叙述错误的是（ ）
A．合成图中mRNA疫苗的模板是病毒S蛋白基因
B．抗原肽与镶嵌在核膜上的MHCI结合，最终呈递到细胞表面激活特异性免疫
C．未修饰的mRNA最终引起炎症部位水肿的原因是血浆渗透压下降，组织液增多
D．与传统疫苗相比，mRNA疫苗的优势是可同时诱导体液免疫和细胞免疫，免疫效果更强
【答案】B
【分析】分析题文描述和题图：mRNA疫苗以胞吞的方式进入树突状细胞，表达出的新冠病毒S蛋白经蛋白酶体水解产生抗原肽，抗原肽与镶嵌在内质网膜上的MHCI结合，呈递在细胞表面，传递给辅助性T细胞和细胞毒性T细胞，诱导体液免疫和细胞免疫的发生。
【详解】A、mRNA疫苗进入细胞后，经翻译形成病毒S蛋白，而mRNA是DNA经过转录来的，故合成图中mRNA疫苗的模板是病毒S蛋白基因，A正确；
B、结合图示可知，抗原肽与镶嵌在内质网膜上的MHCI结合，B错误；
C、血浆蛋白渗出到损伤因子所在部位，血浆渗透压下降，血浆中的水进入组织液引起组织水肿，C正确；
D、由图可知，与传统疫苗（如灭活病毒疫苗、重组疫苗）相比，从特异性免疫类型角度分析mRNA疫苗的优势是可同时诱导体液免疫和细胞免疫，免疫效果更强，D正确。
故选B。
11．研究人员开展了多种植物激素对豌豆植株侧芽生长影响的实验，结果如图所示。据图分析，下列叙述错误的是（ ）
A．顶芽产生的生长素运输到侧芽，抑制了侧芽的生长
B．赤霉素可在一定程度上缓解顶芽对侧芽生长的抑制作用
C．细胞分裂素可在一定程度上缓解顶芽对侧芽生长的抑制作用
D．侧芽中生长素、赤霉素、细胞分裂素的相对含量会影响其生长速度
【答案】B
【分析】1、顶端优势是指顶芽优先生长，侧芽生长受抑制的现象。 2、题图分析：依题意，本实验的目的是探究植物激素对豌豆侧芽生长的影响，实验的自变量是顶芽的有无及涂抹激素的种类，因变量是侧芽平均长度。
【详解】A、比较b、e组实验结果，自变量为有无顶芽。有顶芽时，侧芽平均长度更短，可知顶芽抑制侧芽生长；比较b、d组实验结果可知，顶芽切口是否涂抹生长素。切口涂抹生长素也抑制侧芽生长，由此推测，顶芽通过产生生长素对侧芽生长有抑制作用，A正确；
B、题图中没有设置保留顶芽，侧芽上涂抹赤霉素的实验组，无法得出赤霉素与生长素对侧芽生长的作用，B错误；
C、比较c、e组实验结果，自变量是侧芽是否涂抹细胞分裂素。在侧芽上涂抹细胞分裂素，侧芽生长平均长度大，说明细胞分裂素在一定程度上能缓解侧芽生长所受到的抑制，C正确；
D、分析题图可知，侧芽生长速度不同的原因是侧芽内生长素浓度及其他植物激素（细胞分裂素以及赤霉素等）浓度或比例的改变，侧芽中生长素、赤霉素、细胞分裂素的相对含量会影响其生长速度，D正确。
故选B。
12．逆境响应是指植物应对不良环境的系列反应。研究发现，拟南芥受到干旱胁迫时，TS基因表达下降，生长减缓。用野生型（WT）和TS基因功能缺失突变株（ts）进行实验，结果如图。下列叙述正确的是（ ）
A．研究者的实验设计遵循“加法原理”
B．图1表明TS基因编码的蛋白质抑制IAA的合成
C．据图2推测，长期干旱条件下，TS基因功能会消失
D．植物通过减少全部激素的含量来协调实现逆境响应
【答案】C
【分析】植物激素是由植物体内产生，并从产生部位运输到作用部位，对植物的生长发育具有显著影响的微量有机物。
【详解】A、由图1可知，TS基因缺失会导致IAA含量降低，植株生长减缓，由图2可知，在干旱条件下，TS基因功能缺失突变株（ts）的生存率比野生型植株生存率高。TS基因功能缺失突变株（ts）是去除该基因功能，因此研究者的实验设计遵循的是“减法原理”，A错误；
B、TS基因缺失会导致IAA含量降低，推测TS基因编码的蛋白质促进IAA的合成，B错误；
C、根据图2，在干旱条件下，突变株的生存率更高，而野生型生存率显著降低，因此推测长期干旱条件下，ts数量会逐渐增多，野生型数量会逐渐减少甚至消失，所以野生型的TS基因功能也会随之消失，C正确；
D、植物是通过协调激素含量与逆境响应的关系来维持正常生长的，激素都是相互协调起作用，因此植物响应逆境并不是通过减少或者增加全部激素的含量来实现的，D错误。
故选C。
13．肾上腺包括皮质和髓质两部分，皮质能够分泌糖皮质激素，髓质能够分泌去甲肾上腺素（能使人心跳加快）。研究发现某些神经细胞也能分泌去甲肾上腺素，并与免疫调节有关，其调节机制如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．从免疫角度分析，去甲肾上腺素与抗原的作用类似
B．图中T细胞为辅助性T细胞，其分泌的乙酰胆碱属于神经递质
C．去甲肾上腺素可激活机体内的体液免疫过程
D．人在紧张时肾上腺髓质分泌去甲肾上腺素使心跳加快的过程属于神经——体液调节
【答案】B
【分析】人体稳态的调节机制是神经-体液-免疫调节。
【详解】A、从免疫角度分析，去甲肾上腺素可激活机体内的体液免疫过程，抗原也可激活机体内的体液免疫过程，A正确；
B、图中T细胞为辅助性T细胞，其分泌的乙酰胆碱属于细胞因子，B错误；
C、由图可知，去甲肾上腺素与T细胞表面的去甲肾上腺素受体结合后，可激活机体内的体液免疫过程，C正确；
D、在紧张状态下，肾上腺髓质分泌去甲肾上腺素使心跳加快的过程中涉及神经调节与体液调节，D正确。
故选B。
14．近年来太平湖国家湿地公园得到了有效地保护与恢复，鸟类及各类水生动物数量显著增加。该地是候鸟每年迁徙繁殖地往返途经的临时栖息地，每年的3月、10月都是观赏白鹭、绿头鸭、斑头鸭等鸟群的最佳时期。环境越来越美的太平湖国家湿地公园正成为万鸟的快乐“天堂”。下列叙述正确的是（ ）
A．要研究该地白鹭的生态位，需研究其食物条件、栖息空间、天敌以及与其他物种的关系等
B．白鹭偏好跟随斑头鸭觅食，以便更好地获取食物，与斑头鸭存在互利共生的关系
C．该地候鸟种群数量的变化，仅受种群的出生率、死亡率以及迁入率和迁出率的影响
D．为避免惊扰野生鸟类，调查种群密度时可在定点样方内大量投食尽可能聚集鸟类并逐个计数
【答案】A
【分析】生态位是一个物种在其所生活的生态系统中所占据的特定位置和所扮演的角色。‌反映了物种在资源利用、‌竞争与合作以及避免竞争等方面的特点和策略，‌每个物种的生态位在一个生态系统中都是独特的，‌因为不同物种对资源的需求和利用不同。‌
【详解】A、要研究该地白鹭的生态位，需研究其食物条件、栖息空间、天敌以及与其他物种的关系等，A正确；
B、白鹭偏好跟随斑头鸭觅食，以便更好地获取食物，与斑头鸭存在种间竞争的关系，B错误；
C、该地候鸟种群数量的变化，不仅受种群的出生率、死亡率以及迁入率和迁出率的影响，也受年龄结构和性别比例的影响，C错误；
D、为避免惊扰野生鸟类，调查种群密度时一般红外摄像机和无人机等进行观察，D错误。
故选A。
15．黑曲霉多不耐高温，发酵获得柠檬酸的过程需大量冷却水控制温度，生产成本高。现利用原生质体融合技术获得耐高温高产黑曲霉，过程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株
B．处理②、③用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
C．处理④升高温度即可筛选出耐高温高产黑曲霉
D．发酵结束后通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸
【答案】A
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。
【详解】A、诱变的原理是基因突变，而基因突变具有不定向性，故处理①培养基中黄色圈大的菌落不一定为高产菌株，A正确；
B、黑曲霉的细胞壁成分不是纤维素和果胶，故处理②、③不可以用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，B错误；
C、处理④升高温度后海需要进一步验证才能筛选出耐高温高产黑曲霉，C错误；
D、发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢产物，另一类是菌体本身。如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取，可见题图发酵结束后不能通过适当的过滤、沉淀等方法获得柠檬酸，D错误。
故选A。
16．凝胶阻滞试验（EMSA）的基本原理是：荧光标记的DNA与蛋白质结合后分子量增大，电泳后通过荧光检测可在相应位置显示出阻滞条带。已知O2蛋白通过与ZmGRAS11基因启动子区的mtif序列结合来调控ZmGRAS11基因的表达，科学家为证实mtif序列是与O2蛋白结合的关键序列，利用荧光标记的mtif序列作为指示探针，无荧光标记的mtif序列（WT）和无荧光标记的突变mtif序列（M1～M6）作为7种竞争探针，进行EMSA试验，实验结束后进行荧光检测，结果如下图所示，下列说法错误的是（ ）
注：“+”表示加入相应物质；“-”表示未加入相应物质；竞争探针足够多
A．图中“？”是指荧光标记的指示探针
B．泳道3无阻滞条带的原因是O2蛋白全部与WT探针结合
C．在竞争探针中引入突变可评估突变对竞争探针与O2蛋白结合的影响
D．突变对探针M4～M6与O2蛋白结合能力影响相对较小的是M4、M5
【答案】D
【分析】凝胶阻滞试验，又叫DNA迁移率变动的实验，是在80年代初期出现的用于在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。该方法用来研究DNA与特异性蛋白的相互作用，通常是放射性标记的DNA片段与纯化蛋白，或提取物中的蛋白混合物相结合，然后在非变性凝胶中分析该产物。与游离DNA相比，蛋白质-DNA复合物的迁移率将降低，因此，与游离DNA相对应，人们将观察到带中的“阻滞”。
【详解】A、泳道1，没有加O2蛋白和竞争探针以及“?”，且只有一条指示探针条带，说明图中“?”是指荧光标记的指示探针，A正确；
B、泳道3，加入了O2蛋白和无荧光标记的竞争探针WT探针以及荧光标记的指示探针，只有一条指示探针条带，且于泳道1的指示探针条带宽度相同，说明O2蛋白没有与荧光标记的指示探针结合，都与无荧光标记的竞争探针WT探针结合了，所以观察不到阻滞条带，B正确；
C、O2蛋白与荧光标记的指示探针结合越多阻滞条带就会越宽，指示探针条带就会越窄，而对于加入无荧光标记的突变竞争探针会竞争性的与O2蛋白结合，从而使指示探针的条带会变宽，阻滞条带就会变窄，且突变的竞争探针与O2蛋白结合能力越强，阻滞条带就会越窄，因此在竞争探针中引入突变可评估突变对竞争探针与O2蛋白结合的影响，C正确；
D、加入突变竞争探针M4、M5、M6的泳道，M6的阻滞条带最窄，说明突变的竞争探针中M6与O2蛋白结合能力最强，即M6发生的突变，对其与O2蛋白结合影响相对较小，D错误。
故选D。
二、非选择题:本题共5小题，共52分。
17．（12分，每空2分）植物的生长发育对光的需求是多种多样的，比如光合作用、光形态建成等生理活动都要受到光的影响。
I.植物光合作用吸收和转化光能的过程及相关结构，如下图所示，其中PSI和PSII都是由蛋白质和相关色素组成的复合体，吸收光能后产生高能电子，该电子沿着特定轨道传递。如果高能电子被O2接受，形成的超氧负离子自由基（O2）会损伤光合结构，从而抑制光合作用。回答下列问题：
(1)光能转换路径有：光能→电能→H+浓度势能→ATP中活跃的化学能； 。
(2)当固定能量不能被暗反应及时消耗时，叶绿体中超氧负离子自由基含量会增加，原因是 。此时，C5会在Rubisc酶（能催化C5与CO2反应产生C3）催化下被部分氧化分解产生CO2，同时消耗富余的能量，这就是光呼吸，由此推测光呼吸（填序号）。
①始发于叶绿体基质②可以增加作物产量③可以减缓光合结构的损伤④可以释放能量增加ATP
II.某研究员以拟南芥为实验材料进行实验探究光形态建成的机制，实验结果如图A和图B，隐花色素1(cryl）参与光形态建成作用路径如图C。图C中COP1是一种酶，可以介导蛋白质的降解；HY5是转录因子，可以促进基因的转录。
回答下列问题：
(3)COP1是光形态建成的 (“促进”或“抑制”）因子。
(4)隐花色素1(cryl）主要负责促进花色素苷合成， 等光形态建成反应，其作用的机制是 。
【答案】(1)①光能→电能→NADPH中活跃的化学能
(2) 暗反应速率慢、产生的NADP+少，高能电子缺乏受体，就会传递给O，产生超氧负离子自由基 ①③
(3)抑制
(4) 抑制下胚轴伸长 光（蓝光）下，cryl磷酸化后与SPA1/COP1形成复合物，阻止SPA1/COP1与HY5结合，抑制转录因子HY5被降解，从而完成光形态建成反应
【分析】光合作用：（1）光反应场所在叶绿体类囊体薄膜，发生水的光解、ATP和NADPH的生成；（2）暗反应场所在叶绿体的基质，发生CO2的固定和C3的还原，消耗ATP和NADPH。
【详解】（1）由光合作用的过程，结合图示可知，光反应产生ATP和NADPH，则光能转换路径有：光能→电能→H+浓度势能→ATP中活跃的化学能；光能→电能→NADPH中活跃的化学能。
（2）若固定能量不能被暗反应及时消耗时，则暗反应速率慢、产生的NADP+少，高能电子缺乏受体，就会传递给O，产生超氧负离子自由基。
由题意可知，光呼吸发生时，C5会在Rubisc酶（能催化C5与CO2反应产生C3）催化下被部分氧化分解产生CO2，同时消耗富余的能量，C5与CO2反应产生C3即CO2的固定发生于叶绿体基质，说明Rubisc酶存在于叶绿体基质，则光反应发生于叶绿体基质，本来应用来进行CO2固定的C5被分解，最终会导致光合产物减少，其消耗富余能量，可减缓光合结构的损伤，综上①③正确。
故①③。
（3）由图C可知，COP1可促进HY5降解，而HY5可促进光形态建成，说明COP1是光形态建成的抑制因子。
（4）由图B可知，隐花色素1(cryl）功能缺失突变体花色素苷较野生型低，而下胚轴较野生型长，说明其主要负责促进花色素苷合成，抑制下胚轴伸长等光形态建成反应。由图C可知，光（蓝光）下，cryl磷酸化后与SPA1/COP1形成复合物，阻止SPA1/COP1与HY5结合，抑制转录因子HY5被降解，从而完成光形态建成反应。
18．（8分，每空1分）基因定位是指基因所属的染色体以及基因在染色体上的位置关系测定，是遗传学研究中的重要环节，常用方法有杂交实验定位法、单体和三体定位法、细胞杂交定位法和DNA分子标记法等。
(1)摩尔根通过杂交实验研究果蝇红眼和白眼性状的遗传，首次证明了基因位于染色体上。该研究中所运用的科学方法是 。
(2)果蝇红眼和白眼这一对相对性状分别由位于X染色体上的W和w基因控制，会表现出明显的性别关联，这一现象在白眼（♀）×红眼（♂）亲本组合以及 （以基因型表示）的亲本组合的子代会出现。刚毛（B）和截毛（b）是果蝇的另一对相对性状，现有刚毛、截毛雌雄果蝇纯合个体若干，若要用杂交实验定位法推断B/b基因位于常染色体、仅位于X染色体，还是位于X、Y染色体同源区段上，应选择 （以表型表示）一对亲本组合进行杂交实验。若F1表型及比例为 ，则说明B/b基因仅位于X染色体上；若不符合该表型比，利用现有实验材料设计一个简捷的杂交实验，进一步定位基因位置，实验思路是 。
(3)单体和三体分别指二倍体生物中体细胞的某对同源染色体只有一条或有三条的个体。已知果蝇Ⅳ号染色体三体能存活并能繁殖，其性母细胞中三条同源染色体中任意两条正常联会，多出的一条随机分配。现有一只由基因突变产生的某隐性突变型雄果蝇，为测定该隐性突变基因的染色体位置，让其与Ⅳ号染色体的三体野生型纯合子果蝇（甲）进行杂交实验，如下图：
若F2的果蝇野生型：隐性突变型= ，能够确定该隐性突变的基因位于Ⅳ号染色体上。
(4)第一代DNA分子标记法是分子杂交定位，采用带放射性标记的DNA片段（探针，长度通常在几十到几百个碱基）与目标基因互补配对进行定位，因此探针应选用 部分序列。相较于杂交实验定位法、单体和三体定位法，该方法的优点是 （答出1点即可）。
【答案】(1)假说-演绎法
(2) 红眼（♀）×红眼（♂） 截毛雌性×刚毛雄性 雌性都是刚毛，雄性都是截毛 子一代相互交配，观察子代表型
(3)野生型∶隐性突变型=5∶1
(4) 目的基因 操作相对简单，准确率高
【分析】摩尔根的果蝇眼色遗传实验首次将特定基因定位于特定染色体上，从而证明基因位于染色体上。伴性遗传是指在遗传过程中的子代部分性状由性染色体上的基因控制。
【详解】（1）摩尔根通过杂交实验研究果蝇红眼和白眼性状的遗传，所用方法是假说-演绎法。
（2）果蝇红眼和白眼这一对相对性状分别由位于X染色体上的W和w基因控制，除白眼（♀）×红眼（♂）亲本组合外，红眼（♀）×红眼（♂）亲本，即XWXw×XWY的组合中，子代只有雄性中有白眼，也能表现出性状与性别相关联；刚毛（B）和截毛（b）是果蝇的另一对相对性状，现有刚毛、截毛雌雄果蝇纯合个体若干，若要用杂交实验定位法推断B/b基因位于常染色体、仅位于X染色体，还是位于X、Y染色体同源区段上，应选择截毛雌性（XbXb）与刚毛雄性杂交，若B/b基因仅位于X染色体上，即XbXb×XBY→XBXb、XbY，表现为子代中雌性都是刚毛，雄性都是截毛；若位于X、Y染色体同源区段上，即XbXb×XBYB→XBXb、XbYB，表现为雌雄都是截翅，不符合上述规律，此时可令子一代相互交配，观察子代表型，即XBXb×XbYB→XBXb、XbXb、XBYB、XbYB，子二代中截翅只有雌性。
（3）若该隐性基因（设为a）在Ⅳ号染色体上，则亲本隐性突变体的基因型为aa，三体野生型的基因型为AAA，子一代三体野生型基因型为AAa，与隐性突变体（aa）杂交，由于AAa产生的配子类型和比例为AA∶a∶Aa∶A=1∶1∶2∶2，因此子二代基因型及比例为AAa∶aa∶Aaa∶Aa=1∶1∶2∶2，表型及比例为野生型∶隐性突变型=5∶1。
（4）分析题意，第一代DNA分子标记法是分子杂交定位，鉴定原理是碱基互补配对，因此探针应选用目的基因部分序列；相较于杂交实验定位法、单体和三体定位法，该方法的优点是操作相对简单，准确率高。
19．（12分，除备注外每空1分）失眠属于长期睡眠不足，包括入睡困难和维持睡眠困难。严重的失眠会影响患者认知功能和情绪状态，继而加重失眠，这些神经系统症状的恶性循环与神经递质的分泌改变存在一定关系。请回答下列问题：
(1)突触前膜通过 作用释放神经递质，该过程 （填“需要”或“不需要”）消耗能量。
(2)神经递质与突触后膜上相应的受体结合，形成 ，从而改变了突触后膜对离子的 ，引起电位变化，导致下一个神经元产生 。
(3)γ—氨基丁酸（GABA）约占脑干网状结构所有神经元含量的三分之一，作用机制如图所示，据图分析GABA属于 （填“兴奋性”或“抑制性”）神经递质，理由是 。（2分）
(4)有研究人员提出柴胡加龙骨牡蛎汤可改善失眠现象。请设计实验验证柴胡加龙骨牡蛎汤可改善失眠。
实验材料：生理状态相同的失眠症模型小鼠若干只、生理状态相同的正常小鼠若干只、柴胡加龙骨牡蛎汤、治疗失眠药物X等。
实验思路：取生理状态相同的失眠症模型小鼠随机平均分成三组，三组小鼠分别进行 （3分）处理，另外取一组 作为对照，在适宜条件下饲养相同时间，定期检测睡眠状态并进行对比分析。
【答案】(1) 胞吐 需要
(2) 递质—受体复合物 通透性 兴奋或抑制
(3) 抑制性 GABA与突触后膜上的受体结合后，引起Cl-内流，静息电位的绝对值增大，使下一个神经元受到抑制（3分）
(4) 适量治疗失眠药物X灌胃处理、等量柴胡加龙骨牡蛎汤灌胃处理、等量生理盐水（或清水）灌胃处理 （2分） 生理状态相同的正常小鼠
【分析】兴奋在神经元之间需要通过突触结构进行传递，突触包括突触前膜、突触间隙、突触后膜，具体的传递过程为：兴奋以电流的形式传导到轴突末梢时，突触小泡释放递质（化学信号），递质作用于突触后膜，引起突触后膜产生膜电位（电信号），从而将兴奋传递到下一个神经元。
【详解】（1）突触前膜释放神经递质的方式是胞吐，需要消耗能量，体现了细胞膜的流动性。
（2）信号传递到突触小体时，突触小泡与突触前膜融合，释放神经递质，与突触后膜上的特异性受体结合，形成递质—受体复合物，从而改变了突触后膜对离子的通透性，导致下一个神经元发生兴奋或抑制。
（3）神经递质分为兴奋性神经递质和抑制性神经递质，据图分析，GABA与突触后膜上的受体结合后，引起Cl-内流，静息电位的绝对值增大，使下一个神经元受到抑制，据此推测GABA属于抑制性神经递质。
（4）依题意，实验的目的是验证柴胡加龙骨牡蛎汤可改善失眠，实验应遵循单一变量原则、重复原则和对照原则。根据实验目的及实验原则，取生理状态相同的失眠症模型小鼠随机平均分成三组，三组小鼠的处理情况分别是适量治疗失眠药物X灌胃处理、等量柴胡加龙骨牡蛎汤灌胃处理、等量生理盐水（或清水）灌胃处理，另外取定量的生理状态相同的正常小鼠作为对照，在相同且适宜的条件下饲养相同时间，定期检测每组小鼠失眠状态。
20．（7分，除备注外每空1分）云南滇池是享有高原明珠美誉的淡水湖泊，但受人类干扰使水体富营养化严重。滇池某湿地区域采用“花—鱼—螺蚌—鸟”立体生态修复模式，通过回植净化能力较强的土著植物海菜花、放流土著鱼和螺蚌等重构被打破的生态链环节。该模式对修复区域水质的作用如下图所示，回答下列问题：
(1)“花—鱼—螺蚌—鸟”立体生态修复模式中回植的海菜花属于沉水植物，与滇池中挺水植物、浮水植物等形成群落空间结构中的 结构。该模式选择并合理布设滇池土著生物，使它们形成互利共存关系，主要体现了生态工程所遵循的 原理。
(2)据图分析，该模式对修复区域水体中的有机物具有一定净化作用，依据是 （答出1点即可）。
(3)据图可知，该模式作用下修复区域水体中藻类的含量 （填“减少”或“增加”），出现这一变化的原因可能是 （答出1点即可）。
(4)除采用“花—鱼—螺蚌—鸟”立体生态修复模式，从减少人类干扰的角度分析，滇池湿地生态修复还可以采取的措施是 （答出2点即可）。（2分）
【答案】(1) 垂直 自生
(2)五日生化需氧量下降，说明水体中可被微生物分解的有机物减少；悬浮物中含有有机物，水体中悬浮物浓度下降，说明水体中的有机物减少
(3) 减少 海菜花等吸收水中的氮和磷从而减轻水体富营养化，使藻类不能大量繁殖；放流的鱼（和螺蚌）可以摄食藻类，使水体中藻类含量减少
(4)湿地周围建立缓冲带；减少污水排放；禁止围湖造田；退耕还湿（2分）
【分析】群落的空间结构包括：(1) 垂直结构：植物群落的垂直结构表现垂直方向上的分层性。垂直结构显著提高了群落利用阳光等环境资源的能力；(2) 水平结构：水平方向上由于光线明暗、地形起伏、湿度的高低等因素的影响，不同地段上分布着不同的生物种群；
【详解】（1）群落的空间结构包括垂直结构和水平结构，群落的垂直结构是指在垂直方向上，大多数群落都具有明显的分层现象，因此沉水植物海菜花与滇池中挺水植物、浮水植物等形成群落空间结构中的垂直结构。该模式选择并合理布设滇池土著生物，使它们形成互利共存关系，生物组分能够自我优化、自我调节、自我更新，主要体现了生态工程所遵循的自生原理。
（2）分析题图可知，五日生化需氧量下降，说明水体中可被微生物分解的有机物减少；悬浮物中含有不溶于水的有机物，水体中悬浮物浓度下降，说明水体中的有机物减少，由此推测该模式对修复区域水体中的有机物具有一定净化作用。
（3）结合题干信息可知，该生态模式是通过回植净化能力较强的土著植物海菜花、放流土著鱼和螺蚌等，重构被打破的生态链环节，从而实现对水质的修复。海菜花的净化能力较强，海菜花等吸收水中的氮和磷从而减轻水体富营养化，使藻类不能大量繁殖；放流的鱼（和螺蚌）可以摄食藻类，使水体中藻类含量减少，因此该模式作用下修复区域水体中藻类的含量减少。
（4）从减少人类干扰的角度分析，滇池湿地生态修复还可以采取的措施是湿地周围建立缓冲带；减少污水排放；禁止围湖造田；退耕还湿。
21．（13分，除备注外每空2分）干扰素是一种细胞因子，它具有抗病毒、抑制细胞增殖、调节免疫及抗肿瘤的作用。请回答下列问题。
(1)利用大肠细菌生产人的干扰素时，需要将人的干扰素基因与p质粒载体结合，两者结构如图1。在构建基因表达载体时应选择 （填图中酶的名称）切割DNA获取干扰素基因，同时也用相同的酶切割质粒载体，这样操作的好处是 （回答出2点）。
(2)基因表达载体构建成功后就可以将它导入大肠杆菌，在不含抗生素的普通培养基上将大肠杆菌大量繁殖后，就可以利用选择培养基进一步筛选含干扰素基因的大肠杆菌，请简要叙述该筛选过程： 。（3分）
(3)科学家发现如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸替换成丝氨酸，可以延长它的保存时间，氨基酸的替换可用重叠延伸PCR技术对原干扰素基因进行改造来实现，基本过程如图2所示。引物与模板DNA链碱基之间的化学键是 ，重叠延伸DNA分子需要进行三次不同的PCR过程，设计的引物2和3应该含有突变碱基可以实现氨基酸的替换，并且两个引物的碱基应该 （填“相同”或“互补”），其中PCR3过程需要使用的引物为 （填图2中的引物数字序号）。
【答案】(1) 酶 G 和酶F ①避免目的基因和质粒的任意连接;②防止目的基因和质粒的自身环化
(2)采用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种在含有氨苄青霉素（AmpR）的选择培养基（A）上培养一段时间,再将生长的菌落用绒布接种在含四环素（TetR）的选择培养基（B）上,培养后观察,挑取能在 A 上生长但是不能在 B 上生长的菌落,即为含有干扰素基因的大肠杆菌（3分）
(3) 氢键 互补 1 和 4
【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。PCR反应过程是：变性→复性→延伸。
【详解】（1）利用大肠细菌生产人的干扰素时，需要将人的干扰素基因与p质粒载体结合，两者结构如图1。在构建基因表达载体时应选择酶 G 和酶F，因为这两种酶在目的基因的两端，但不选择酶E的原因是由于P载体中有两个酶E的切割位点，切割DNA获取干扰素基因，同时也用相同的酶切割质粒载体，这样操作的好处是一方面可以避免目的基因和质粒的任意连接，另一方面还可防止目的基因和质粒的自身环化。
（2）基因表达载体构建成功后就可以将它导入大肠杆菌，在不含抗生素的普通培养基上将大肠杆菌大量繁殖，其目的是获得数量较多的大肠杆菌，便于筛选，而后利用选择培养基进一步筛选含干扰素基因的大肠杆菌，又知P质粒上含有两种抗生素基因，而目的基因表达载体中四环素基因被破坏，只含有氨苄青霉素抗性基因，为了筛选出成功导入目的基因的大肠杆菌，则该操作的设计思路为：采用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种在含有氨苄青霉素（AmpR）的选择培养基（A）上培养一段时间，则在A培养基上生长的是含有目的基因表达载体和空质粒的大肠杆菌，而后再将生长的菌落用绒布接种在含四环素（TetR）的选择培养基（B）上，则含有目的基因表达载体的大肠杆菌在B培养基上不能生长，通过培养后观察，因此，挑取能在 A 上生长但是不能在 B 上生长的菌落，即为含有干扰素基因的大肠杆菌。
（3）科学家发现如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸替换成丝氨酸，可以延长它的保存时间，氨基酸的替换可用重叠延伸PCR技术对原干扰素基因进行改造来实现，基本过程如图2所示。引物与模板DNA链碱基之间的化学键是氢键，氢键发生在互补的碱基之间，重叠延伸DNA分子需要进行三次不同的PCR过程，设计的引物2和3应该含有突变碱基可以实现氨基酸的替换，并且两个引物的碱基应该“互补”，而后才能互为引物实现子链延伸，其中PCR3过程需要使用的引物为PCR1产物的上链和PCR2产物的下链，而后通过PCR3过程获取含有突变基因的双链DNA，而后用该DNA为模板，在引物1和4的作用下实现目标基因的扩增。